當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>感覺態(tài)細胞>>表達感受態(tài)細胞>> F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書
產(chǎn)地 | 進口 | 加工定制 | 否 |
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適用領(lǐng)域 | 其他 |
使用說明:
1. F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書取100 μl感受態(tài)細胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。
培養(yǎng)方法:
F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況,如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
ELISA Kit for Human Kallikrein-7
96T0.312-20 ng/mL人角蛋白13(KRT13)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 13
96T0.156-10 ng/mL人細胞角蛋白17(KRT-17)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 17
96T1.56-100 ng/mL人激肽原1(KNG1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Kininogen-1
96T78-5000 pg/mL人Ras激酶抑制劑2(KSR2)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Kinase suppressor of Ras 2
96T15.6-1000 pg/mL人kelch樣蛋白17(klhl17)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Kelch-like protein 17
96T0.156-10 ng/mL人角蛋白Ⅱ型表皮細胞骨架2 (Keratin, type II cytoskeletal 2 epidermal)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Keratin, type II cytoskeletal 2 epidermal
96T0.156-10 ng/mL人細胞角蛋白19(KRT-19)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 19
F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書小鼠垂體瘤細胞;GT1-1
小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3
小鼠畸胎瘤細胞;P19
小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12
小鼠血細胞;WEHI-3 [WEHI3]
小鼠成纖維細胞;φ2
小鼠紅白血病細胞;MEL
小鼠骨髓瘤細胞;Sp2/0-Ag14
小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20
中文名稱:F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書
規(guī)格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋
操作方法:
一 、F-BL21(DE3) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書熱激轉(zhuǎn)化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預冷的搖菌管中,加入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率),37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。
4. 根據(jù)實驗要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平 板,37℃過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養(yǎng)基中復蘇以提高轉(zhuǎn)化效率,當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉(zhuǎn)移到37℃預熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預熱。
2. DH 5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
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