當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>感覺態(tài)細胞>>表達感受態(tài)細胞>> M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書
產(chǎn)地 | 進口 | 加工定制 | 否 |
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適用領域 | 其他 |
操作方法:
一 、M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書熱激轉化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細胞轉移到-20℃過夜預冷的搖菌管中,加入質?;蜻B接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉化效率),37℃、180rpm、45分鐘復蘇菌種。
4. 根據(jù)實驗要求(質粒,重組連接產(chǎn)物轉化),吸取不同體積已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平 板,37℃過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
二、10分鐘快速轉化法
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養(yǎng)基中復蘇以提高轉化效率,當使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態(tài)細胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉移到37℃預熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預熱。
2. DH 5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細胞-DNA混合物轉移到已經(jīng)37℃預熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
使用說明:
1. M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書取100 μl感受態(tài)細胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。
培養(yǎng)方法:
M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書收到細胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況,如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
中文名稱:M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書
規(guī)格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋
ELISA Kit for Human Interleukin-6 receptor subunit beta
96T31.2-2000 pg/mL人細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Intercellular adhesion molecule 1
96T31.2-2000 pg/mL人γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Interferon gamma
96T78-5000 pg/mL人胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor I
96T0.156-10 ng/mL人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor II
96T0.156-10 ng/mL人胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 1
96T7.8-500 pg/mL人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Interferon alpha-1/13
96T0.156-10 ng/mL人前列腺特異性抗原前體(proPSA)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Indian hedgehog protein
M15(pREP4) 感受態(tài)細胞100ul*10說明書人前列腺癌低轉移細胞株;PC-3M-2B4
人肺巨細胞癌高轉移細胞株;PG-BE1
人肺巨細胞癌低轉移細胞株;PG-LH7
人結直腸腺癌細胞;SW620 [SW 620;SW-620]
人腦星形膠質母細胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]
人肺癌細胞;A-427 [A427]
人胰腺癌細胞;AsPC-1
人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;C918
人髓母細胞瘤細胞;Daoy
人導管癌細胞;HCC38
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