當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>感覺態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞>> JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書
產(chǎn)地 | 進口 | 加工定制 | 否 |
---|---|---|---|
適用領(lǐng)域 | 其他 |
操作方法:
一 、JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書熱激轉(zhuǎn)化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預(yù)冷的搖菌管中,加入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率),37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4. 根據(jù)實驗要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平 板,37℃過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率,當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. DH 5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
使用說明:
1. JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。
培養(yǎng)方法:
JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況,如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細(xì)胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細(xì)胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細(xì)胞*脫離瓶壁分離成單個細(xì)胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
中文名稱:JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書
規(guī)格:100ul*10
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運輸,單加10kg干冰費
單位: 袋
ELISA Kit for Human Serum amyloid P-component
96T78-5000 pg/mL人血小板解整合素樣金屬蛋白酶20(ADAMTS20)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 20
96T15.6-1000 U/L人α-淀粉酶1(Alpha-amylase 1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Alpha-amylase 1
96T0.156-10 ng/ml人膜聯(lián)蛋白A6(ANXA6)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Annexin A6
96T78-5000 pg/ml人α輔肌動蛋白4 (Alpha-actinin-4)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Alpha-actinin-4
96T0.156-10 ng/mL人天青殺素(Azurocidin)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Azurocidin
96T15.6-1000 pg/mL人血小板解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAMST8)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 8
96T3.12-200 U/L人腺苷脫氨酶(Adenosine deaminase)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Adenosine deaminase
JM110 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10說明書96T0.312-20 ng/mL人溶質(zhì)載體家族30成員8(SLC30A8)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Zinc transporter 8
96T0.625-40 ng/mL人鞘氨醇1磷酸酯受體2(S1PR2)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Sphingosine 1-phosphate receptor 2
96T0.312-20 ng/mL人鈉鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2(NKCC2)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Solute carrier family 12 member 1
96T0.156-10 ng/mL人鈉鈣交換蛋白1(NCX1/SLC8A1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Sodium/calcium exchanger 1
96T15.6-1000 pg/mL人二價金屬轉(zhuǎn)運蛋白1(DMT1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Natural resistance-associated macrophage protein 2
96T0.312-20 ng/mL人線粒體天冬氨酸谷氨酸載體同工型1(AGC1/SLC25A12)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1
96T0.312-20 ng/mL人線粒體天冬氨酸谷氨酸載體同工型2(ARALAR2/SLC25A13)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar2
96T0.156-10 ng/mL人Saitohin蛋白(STH)ELISA試劑盒人
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),儀表網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。