當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>感覺態(tài)細(xì)胞>>克隆感受態(tài)細(xì)胞>> *0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書
產(chǎn)地 | 進(jìn)口 | 加工定制 | 否 |
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適用領(lǐng)域 | 其他 |
中文名稱:*0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書
規(guī)格:50ul*5
用途:生化試劑。(用于科研試驗研究)
儲存條件: -70℃保存,必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
外觀:(性狀) 干冰運(yùn)輸,單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋
使用說明:
1. *0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養(yǎng)45~60min使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12~16h。
培養(yǎng)方法:
*0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書收到細(xì)胞后,在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況,如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)實(shí)驗又要開始了,科研工作者又該忙碌了,大家可能都在尋找適合自己的細(xì)胞,不用急,我們幫您掌舵,讓您滿意!
傳代方法:細(xì)胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細(xì)胞*脫離瓶壁分離成單個細(xì)胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
ELISA Kit for Human Apolipoprotein A-II
96T0.312-20ng/mL人環(huán)AMP依賴性轉(zhuǎn)錄因子(ATF-2)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human cAMP-dependent transcription factor ATF-2
96T1.56-100 ng/mL人細(xì)胞質(zhì)肌動蛋白1(Actin, cytoplasmic 1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Actin, cytoplasmic 1
96T0.156-10 ng/mL人多藥耐藥蛋白1(MDR1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Multidrug resistance protein 1
96T0.156-10 ng/mL人細(xì)胞骨架活性調(diào)節(jié)蛋白(ARC)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Activity-regulated cytoskeleton-associated protein
96T0.312-20 ng/mL人腺苷脫氨酶樣蛋白(Adenosine deaminase-like protein)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Adenosine deaminase-like protein
96T0.156-10 ng/mL人脂肪細(xì)胞膜相關(guān)蛋白(APMAP)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Adipocyte plasma membrane-associated protein
96T0.625-40 ng/mL人醛脫氫酶(Aldehyde oxidase)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Aldehyde oxidase
*0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書96T0.156-10 ng/mL人類固醇5α還原酶1(SRD5α1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human 3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1
96T0.312-20 ng/mL人信號素5A(SEMA5A)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Semaphorin-5A
96T15.6-1000 pg/mL人S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Protein S100-A12
96T0.312-20 U/L人山梨醇脫氫酶(SORD)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Sorbitol dehydrogenase
96T0.312-20 ng/mL人S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Protein S100-A7
96T0.156-10 ng/mL人鞘氨醇激酶受體1(S1P receptor 1)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Sphingosine 1-phosphate receptor 1
96T1.56-100 ng/mL人分泌性卷曲相關(guān)蛋白5(sFRP-5)ELISA試劑盒人
ELISA Kit for Human Secreted frizzled-related protein 5
96T0.312-20 ng/mL人絲氨酸肽酶抑制因子K1(SPINK1)ELISA試劑盒人
操作方法:
一 、*0 電擊感受態(tài)細(xì)胞50ul*5說明書熱激轉(zhuǎn)化法
1. 從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞冰浴融化后,吸取100μl感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到-20℃過夜預(yù)冷的搖菌管中,加入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物,輕輕混勻,冰浴30分鐘。
2. 42℃水浴熱激60秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,該過程不要搖動搖菌管。
3. 向搖菌管中加入900μl 37℃溫浴的SOC或LB(SOC培養(yǎng)基可提高2-3倍轉(zhuǎn)化效率),37℃、180rpm、45分鐘復(fù)蘇菌種。
4. 根據(jù)實(shí)驗要求(質(zhì)粒,重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化),吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上,將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于37℃至液體被吸收,倒置平 板,37℃過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
二、10分鐘快速轉(zhuǎn)化法
注:在使用卡那霉素,四環(huán)素等作為篩選抗性時,需要在SOC培養(yǎng)基中復(fù)蘇以提高轉(zhuǎn)化效率,當(dāng)使用氨芐青霉素作為篩選抗性時,該步驟可以省略。感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物在冰上孵育5-10分鐘后加入4倍體積的37℃溫浴的SOC培養(yǎng)基,在37℃ 180rpm孵育1小時,然后轉(zhuǎn)移到37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上。
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2. DH 5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置5分鐘。
3. 用200μl槍將感受態(tài)細(xì)胞-DNA混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
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