實(shí)驗(yàn)操作步驟：  

a．采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動(dòng)物。

b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。

c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品介紹：

名稱    小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞

2.組織來(lái)源：腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞分離自下丘腦；下丘腦又稱丘腦下部，位于大腦腹面、丘腦的下方，是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動(dòng)和內(nèi)分泌活動(dòng)的較高級(jí)神經(jīng)中樞所在。下丘腦自前向后可分三部﹐即前部（又名視前區(qū)和視上區(qū)）﹑中部（結(jié)節(jié)區(qū)）和后部（乳頭體區(qū)）。下丘腦具有許多細(xì)胞核團(tuán)和纖維束﹐與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其它部位具有密切的相互聯(lián)系。它不僅通過(guò)神經(jīng)和血管途徑調(diào)節(jié)腦垂體前﹑后葉激素的分泌和釋放﹐而且還參與調(diào)節(jié)自主神經(jīng)系統(tǒng)﹐如控制水鹽代謝﹑調(diào)節(jié)體溫﹑攝食﹑睡眠﹑生殖、內(nèi)臟活動(dòng)以及情緒等。下丘腦神經(jīng)元與來(lái)自其他部位的神經(jīng)纖維有廣泛的突觸聯(lián)系，可以接受很多神經(jīng)沖動(dòng)，為內(nèi)分泌系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的中心。它們能調(diào)節(jié)垂體前葉功能，合成神經(jīng)垂體激素及控制自主神經(jīng)和植物神經(jīng)功能。故提取下丘腦神經(jīng)元進(jìn)行體外培養(yǎng)，建立下丘腦神經(jīng)元體外實(shí)驗(yàn)平臺(tái)具有重要意義。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-M242

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2. 將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3. 預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上，進(jìn)行傳代。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

5mL 上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

100mL BES Buffer,0.5M,pH6.0  BES Buffer,0.5M,pH6.0  常溫保存

50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)（100-5000bp） DNAMETER 4℃保存

2 ug pAdEasy-1 pAdEasy-1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

培養(yǎng)基2（USP） Medium 2 250g

1瓶 F9細(xì)胞株 F9 低溫運(yùn)輸和保存

吖啶黃素（3.0mg） Acridine Fl

小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞明膠蛋白胨 英文名稱：Gelatin Peptone 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

玉米浸粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒*直銷

馬鈴薯浸出粉 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

蛋白胨（250g） 英文名稱：Peptone 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠25羥基D3(25 HVD3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

瓊脂粉 英文名稱：Agar Powder 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠25羥基(25-OHC)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

瓊脂粉(組培專用) 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠20S蛋白體(20SP)免疫試劑盒*直銷

MS培養(yǎng)基 英文名稱：MS Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

knudson C 培養(yǎng)基 英文名稱：knudson C Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

1/4MS培養(yǎng)基 英文名稱：1/4 MS Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

B5培養(yǎng)基 英文名稱：B5 Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒*直銷