當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖酵解系列>> 果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)微量法檢測試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6619 |
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6619 |
商品介紹
測定意義 植物葉綠體中果糖1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反應(yīng),在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應(yīng)。 測定原理 果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮,在磷酸丙糖異構(gòu)酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、震蕩儀、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
Bacillus thuringiensis食管鱗狀上皮癌抗原1檢測試劑盒
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果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)微量法檢測試劑盒3A分子篩 80-100目,氣相、液相色譜柱骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨分化因子)
分子篩3A 干燥劑用化成視網(wǎng)膜瘤抑癌蛋白抗體
分子篩, 3 ? pellets, 3-5 mmG蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗體
分子篩, 3 ? pellets, 2-3 mm核受體RXRα抗體
4A分子篩 20-40目,氣相、液相色譜柱Rho相關(guān)蛋白激1抗體
4A分子篩 40-60目,氣相、液相色譜柱環(huán)指蛋白156抗體
4A分子篩 60-80目,氣相、液相色譜柱RRAD抗體
4A分子篩 80-100目,氣相、液相色譜柱Runx3抗體
分子篩4A 2mm-3mm,干燥劑用Rad51抗體
分子篩, 4 ? beads, 4-8 mesh 維受體RAR α/RAR α抗體
分子篩, 4 ? beads, 8-12 mesh維受體β抗體
分子篩, 5 ? 20-40目,氣相、液相色譜柱Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體
分子篩, 5 ? 40-60目,氣相、液相色譜柱抵抗素抗體
分子篩, 5 ? 60-80目,氣相、液相色譜柱RhoA抗體
分子篩, 5 ? 80-100目,氣相、液相色譜柱Rho相關(guān)蛋白激2抗體
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
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