當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>其它系列>> 莽草酸脫氫酶(SD)紫外分光光度法
國產(chǎn)貨號 | GOY-01S6954 |
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操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6954 |
商品介紹:
測定意義
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關(guān)鍵酶。
測定原理:
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實驗方法學:
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit植物B12(VB12)ELISA試劑盒,
雙特異性22抗體Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA Kit白介素9(IL-9)ELISA試劑盒--動物,人
Erdj5/DNAJC10蛋白抗體Human COL7A1(Collagen alpha-1(VII) chain) ELISA Kit幽門螺旋IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒--動物,人
腫瘤調(diào)亡素/腫瘤壞死因子受體死亡受體6抗體Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA KitHE 瓊脂(HE)
跨膜TMIGD1蛋白抗體Human BDG(beta-D-glucan) ELISA KitG C瓊脂用于淋球的分離培養(yǎng)(OXOID方法)
軸絲中鏈動力蛋白抗體Human TAT (Tyrosine aminotransferase) ELISA KITL-
軸絲動力蛋白7抗體Human SKI (Ski oncogene) ELISA KITL-去腺素
環(huán)指蛋白19抗體Human HMGA2(High mobility group protein HMGI-C) ELISA Kit白屈菜堿 Chelidonine
莽草酸脫氫酶(SD)紫外分光光度法線粒體呼吸鏈復合物I 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠丙二醛(MDA)免疫試劑盒*直銷
豬β4(Thymosin β4)免疫試劑盒進口、分裝
猴子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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腓骨蛋白2(FBLN2)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠糖蛋白130(gp130)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
甲型流感H7N7 HA 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠白介素18(IL-18)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雞粒細胞集落刺激因子受體(G-CSFR)免疫試劑盒進口、組裝
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