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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>其它系列>> 過(guò)氧化物酶(POD)可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào) | GOY-01S6407 |
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
50管/48樣 | 可見(jiàn)分光光度法 | GOY-01S6407 |
商品介紹
測(cè)定意義 POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過(guò)氧化氫氧化酚類(lèi)和胺類(lèi)化合物,具有消除過(guò)氧化氫和酚類(lèi)、胺類(lèi)毒性的雙重作用。 測(cè)定原理: POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
Paenibacillus macerans螯合肽檢測(cè)試劑盒
Paenibacillus macerans金屬忍耐蛋白檢測(cè)試劑盒
Paenibacillus macerans類(lèi)粘蛋白檢測(cè)試劑盒
Bacillus subtilis subsp. subtilis亞還原檢測(cè)試劑盒
Clostridium acetobutylicum腺苷-5-磷酰還原檢測(cè)試劑盒
Lactobacillus rhamnosus氧乙酰 (硫)裂解檢測(cè)試劑盒
Acetobacter acetiATP化檢測(cè)試劑盒
Arthrobacter sp.可溶性淀粉合成檢測(cè)試劑盒
過(guò)氧化物酶(POD)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒N-吡咯烷酮(NMP) standard for GC, ≥99.9%(GC)Anti-Nogo R 軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子受體/Nogo受體抗體人皮膚衍生肽抑制劑3(PI3/Elafin)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-吡咯烷酮 >99.5% (GC)Anti-Nogo-A 軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子-A抗體人α-酚轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TTPα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-吡咯烷酮 用于多肽合成, ≥99.5% (GC)Anti-Nogo-B/A 軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子-B/A抗體人Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-吡咯烷酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-NOS-1 一氧化氮合成-1抗體(神經(jīng)型)人白介素21(IL-21)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
98%Anti-NOS-2/iNOS 一氧化氮合成-2抗體(誘導(dǎo)型)人類(lèi)琥珀半脫氫(SSADH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
丁酯 99%Anti-NOS-2/iNOS 一氧化氮合成-2抗體(誘導(dǎo)型)人骨膜蛋白(POSTN/OSF-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
1--9,10-二乙炔蒽 97%Anti-NOS-3/eNOS 一氧化氮合成-3抗體(內(nèi)皮型)人質(zhì)金屬蛋白15(MMP-15)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
1,8-二-9,10-二乙炔蒽 90%Anti-Phospho-eNOS (Ser1177) 化一氧化氮合成3抗體(內(nèi)皮型)人質(zhì)金屬蛋白14(MMP-14)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
六酰三 98%Anti-Phospho-eNOS (Ser113) 化一氧化氮合成3抗體(內(nèi)皮型)人低密度脂蛋白(VLDL)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
四烷絡(luò)合物 1M solution in THFAnti-Phospho-eNOS (Thr495) 化一氧化氮合成3抗體(內(nèi)皮型)人卵脂膽固酰轉(zhuǎn)移(LCAT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-乙烯吡 97%Anti-Nitric oxide/NO 一氧化氮抗體人色素P450家族成員2E1(CYP2E1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
琥珀二酯 AR,99%Anti-Notch1/MOTC 跨膜受體蛋白Notch-1抗體人泛素交叉反應(yīng)蛋白 (UCRP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
富馬二乙酯 98%Anti-Notch3 跨膜受體蛋白Notch-3抗體人α干擾素(IFN-α)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
馬來(lái)二酯 98%Anti-Nox-4/NADH NADPH氧化4抗體人肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-NADPH 還原型輔Ⅱ抗體人透明質(zhì)結(jié)合蛋白1(HABP1/C1QBP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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