當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> 子宮頸表皮癌細(xì)胞:ME-180
猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞:RF/6A
貨號 | GOY-01X0154 |
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | 子宮頸表皮癌細(xì)胞:ME-180 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 細(xì)胞系 |
貨號 | GOY-01X0154 |
商品介紹:
名稱 子宮頸表皮癌細(xì)胞:ME-180 別稱Me-180; ME 180; ME180 種屬人類 年齡(性別)女性,66歲 組織來源宮頸表皮樣癌網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述ME-180細(xì)胞來源于一個(gè)細(xì)胞集落不規(guī)則沒有顯著角質(zhì)化的侵染性鱗狀細(xì)胞癌。單層培養(yǎng)的ME-180細(xì)胞間可以觀察到帶狀連接,也注意到有細(xì)胞質(zhì)張力絲。1970年,發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。TNF-α抑制ME-180細(xì)胞的生長;ME-180細(xì)胞含有人乳頭瘤病毒DNA,與HPV-39的同源性高于HPV-18。 生物安全等級2 生長培養(yǎng)基McCoy's 5A+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~36小時(shí) 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 致瘤性Yes, in nude mice; forms well differentiated epidermoid carcinoma (grade I). 抗原表達(dá)情況Blood Type A; Rh+; HLA A1, A11, B5(+/-), B40 基因表達(dá)情況Oncogenes: p53+; pRB+ |
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠 CD4 基因全長ORF克隆
大鼠 CCL27 基因全長ORF克隆
大鼠 WFDC2 基因全長ORF克隆
大鼠 IL7RA / CD127 基因全長ORF克隆
大鼠 IL10 基因全長ORF克隆
大鼠 Thrombopoietin / THPO 基因全長ORF克隆
大鼠 IL23A 基因全長ORF克隆
大鼠 ERBB2 基因全長ORF克隆
大鼠 IL12A / P35 基因全長ORF克隆
大鼠 IL9R 基因全長ORF克隆
子宮頸表皮癌細(xì)胞:ME-180 Thymosin beta 4 胸素β4抗體 規(guī)格: 0.2ml
BTBD1 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(丙型毒的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體 規(guī)格: 0.2ml
A1CF/Apo B RNA editing protein 載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
MARCH7/Axotrophin 膜相關(guān)環(huán)指蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
瓊脂培養(yǎng)基K Agar medium K (Xylose,lysine,deoxycholate agar) 250g
5g 鳥苷 Guanosine 室溫保存
125mL MES Lysis Buffer with NP-40,2X MES Lysis Buffer with NP-40,2X 常溫保存
100mL 動(dòng)物DNAout Animal DNAOUT 常溫
1瓶 JEG-3/VP16細(xì)胞株 JEG-3/VP16 低溫運(yùn)輸和保存
50T 瘧原蟲PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
10 mg Lucigenin(光澤精) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
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