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具有如下優(yōu)點:
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;
五、性價比非常好,節(jié)省實驗經費。
產品名稱:魚磷酸果糖激酶(PFK)elisa試劑盒
英文名稱:Fish Phosphofructokinase,PFK ELISA Kit
規(guī)格:48T/96T
保存: 2-8℃(頻繁使用時);-20℃(長時間不用時)。
有效期: 6 個月(4℃);12 個月(-20℃)。
用途: 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液
選擇ELISA試劑盒應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價。
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操作流程如下:
(1)僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
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注意事項:
1加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
甲噻;賽拉NCK1 (5B7) Mouse mAbN-基-2-氨甲基吡咯烷
酵母多糖 A(>98% (HPLC),BC)TAF1 (D6J8B) Rabbit mAb1-N-Cbz-甲酰基吡咯烷
3,5-二甲酸(>98%,BR)XBP-1s (D2C1F) Rabbit mAb2,2-二氧基烷
40%溶液Phospho-Progesrone Receptor (Ser345) Antibody?;量┩?/span>
硫酸鈣(>99%,BR)Human Inrleukin-6 Receptor α (hIL-6Rα)三氧基(2-甲基基)硅烷
硝酸鈷六水(>98.0-102.0%,BR)Human Inrleukin-6 Receptor α (hIL-6Rα)三氧基-(2-咪唑-1-啉基)烷基硅烷
二環(huán)己基碳二亞(>99%,BR)CDK4 (D9G3E) Rabbit mAb三氧基硅烷
鹽酸鑭六水(>99%,BR)CDK4 (D9G3E) Rabbit mAb基三氧基硅烷
三氧化鉬(>98%,BR)Glutama Dehydrogenase 1/2 (D9F7P) Rabbit mAb正辛基三氧基硅烷
化鎳六水(>98%,BC)GLDC Antibody2--1,1,1-三氧基烷
木瓜蛋白酶懸浮液AFAP1L2/XB130 (D4A5) Rabbit mAb(S)-(-)-2-氨基丁烷
磺酸鈉(>98%,BR)CYLD (D6O5O) Rabbit mAb(R)-(-)-2-氨基丁烷
過氧化物歧化酶(SOD)Acetyl-Histone H2B (Lys5) (D5H1S) XP® Rabbit mAb三烷基(三氟甲基)硅烷
四正丁基溴化銨(>98%,BC)Acetyl-Histone H2B (Lys5) (D5H1S) XP® Rabbit mAb1,二酰氧-2-(二酰氧氧基)烷
三十烷(>98%,植物激素級)STF-1 (D1Z2A) XP® Rabbit mAb甲基二氧基硅烷
羥基甲(>98.0%,BR)K48-linkage Specific Polyubiquitin (D9D5) Rabbit mAb (HRP Conjuga)2,4,6-三基-2,4,6-*基環(huán)三硅氧烷
低內毒素牛血清白蛋白PDBu (Phorbol 122,2,2-三氟磺酸酯
梭菌蛋白酶PTMScan® Cleaved Caspase Substra Motif [DE(T/S/A)D] Kit(R)-(-)-2-氨基-1-芐氧基丁烷
魚磷酸果糖激酶(PFK)elisa試劑盒GTP結合蛋白4抗體(慢性腎功能衰竭蛋白)Questin中文名:大黃素-8-甲醚別名:1,6-Dihydroxy-8-methoxy-3-methylanthraquine分子式:C16H12O5
磷脂酰基醇蛋白聚糖-5抗體Questil中文名:ω-羥基大黃素-8-甲醚別名:分子式:C16H12O6
磷脂?;嫉鞍拙厶?/font>-6抗體Aloin中文名:蘆薈苷別名:Aloin A; Barbaloin; 蘆薈素分子式:C21H22O9
谷氨酰胺合成酶/谷氨酸氨連接酶抗體Aurantio-obtusin中文名:橙黃決明素別名:Aurantioobtusin分子式:C17H14O7
磷酸二羥丙酮酰基轉移酶抗體1-O-Methylnataloe-emodin中文名:別名:分子式:C16H12O5
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