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超氧陰離子可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2022-04-24 15:22:19瀏覽次數(shù):125次

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生化檢測(cè)試劑盒
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貨號(hào) GOY-01S6432
超氧陰離子可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:鮭魚補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA Kit,48T/96T
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人生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP) ELISA Kit,48T/96T
小鼠生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA Kit,48T/96T

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商品屬性:

產(chǎn)品名稱

超氧陰離子可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒

規(guī)格

50管/48樣

檢測(cè)方法

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)

GOY-01S6432

商品介紹:

測(cè)定意義

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用,但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。

測(cè)定原理:

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據(jù)A530值可以計(jì)算樣品中O2-含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血35ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50100μl,可抗凝鼠血24ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔510分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使25ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置12小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

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超氧陰離子可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒試劑汞 ACS,99.9995% metals basis犬骨成型蛋白7(BMP7)免疫試劑盒化埃茲蛋白抗體MYOM2  肌間蛋白2抗體

化汞 AR,99.5 %(劇品)犬骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒嗜性粒陽(yáng)離子蛋白抗體MYOM1  肌間蛋白1抗體

化汞 ACS(劇品)犬鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒E1A樣分化抑制因子3抗體Myoglobin  肌紅蛋白抗體

化汞 AR,99.5%(劇品)犬弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)免疫試劑盒骨骼肌烯化抗體MyoGEF  肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體

化汞 CP,99.0%(劇品)犬睪酮(T)免疫試劑盒真核翻譯起始因子2C1抗體MYOG/Myogenin  肌紅蛋白抗體(肌生成素)

硝汞 AR,98.5%(劇品)犬高遷移率族蛋白A2(HMGA-2)免疫試劑盒化eIF4E結(jié)合蛋白抗體MyoD1/Myf3  肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體

硝汞 CP,98.0%(劇品)犬高遷移率族蛋白A1(HMGA-1)免疫試劑盒附睪蛋白抑制蛋白Myocardin  促血管平滑肌分化因子抗體

硝汞 GR,99.0%(劇品)犬高爾體膜蛋白1(GOLM1)免疫試劑盒內(nèi)皮素B受體抗體MYLK3  肌球蛋白輕鏈激3抗體

紅色 AR,99.5%(劇品)犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)免疫試劑盒大腸桿菌脂多糖抗體MYLK2  肌球蛋白輕鏈激2抗體

黃色 AR,99.5%(劇品)犬肝堿性(L-ALP)免疫試劑盒GLP1類似蛋白Exendin4抗體MYLIP/Idol  低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白抗體

乙汞 AR,98.0%(劇品)犬甘油-3-脫氫(GAPDH)免疫試劑盒化真核翻譯起始因子4B抗體MYL9  肌球蛋白輕鏈9抗體

 AR,99.5%(劇品)犬干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒上皮癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體MYL7  肌球蛋白輕鏈7抗體

 CP,99.0%(劇品)犬泛素蛋白(Ub)免疫試劑盒化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體MYL6  肌球蛋白輕鏈6抗體

硝亞汞 CP,98% 犬兒茶酚抑素(CAT)免疫試劑盒化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體MYL3/Myosin light chain 3  肌球蛋白輕鏈3抗體

汞溴紅 24~27%犬多肽YY(PYY)免疫試劑盒化因子受體抗體MYH9  肌球蛋白重鏈9抗體

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

 


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