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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>細(xì)胞系>> 腺病毒E型LAMP試劑盒
猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞:RF/6A
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腺病毒E型LAMP試劑盒
英文名稱:Adenovirus e lamp Kit
貨號(hào):GOY-L63655
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
猿猴病毒40大腫瘤抗原氨基段肽段基異酸酯
生長(zhǎng)抑制素-28酐
物質(zhì)P(1-7)鄰溴芐
物質(zhì)P(1-9)氟-2-(三氟甲基)甲
物質(zhì)P(7-11)2-甲基-甲氧基
TA-0910,他替瑞林甲氧基肼鹽酸鹽
促甲狀腺激素釋放激素,游離酸溴吡啶鹽酸鹽
尿皮質(zhì)激素Ⅲ,小鼠(R)-(+)-叔丁基亞磺酰
纈絡(luò)肽(VQY),豬偶氮二甲酸二酯
血管活性腸肽6-硝基吲哚啉
Z-Ala-Ala-Leu-pNA2-甲基-5-甲酸
三亞甲基碳酸酯2-氟-
(氨基基)嗎啉-酮2-氨基-吡啶
碳酸錳(>98%,BR)2-氨基-6-溴吡啶
酸二氫錳(>98%,BR)4,6-二羥基-2-甲巰基嘧啶
馬來(lái)酰亞基甲酸-N-羥基琥珀酰亞酯(>97%,BC)芐氧基酰
2-巰基并噻唑(>98%,BC)2-甲基氮雜環(huán)丁烷
松三糖單水;D-(+)-松三糖一水2,二茴香
腺病毒E型LAMP試劑盒BADH2(水稻)GDF8/MSTN/FITC 熒光素標(biāo)記羊抗生長(zhǎng)分化因子8/肌肉抑制素IgG100 ul
丁酰膽酯酶單克隆GDF-9/FITC 熒光素標(biāo)記抗生長(zhǎng)、分化因子9IgG100 ul
酸化β 連環(huán)素蛋白GDNF/FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子IgG100 ul
β-球蛋白GDNF Receptor alpha 2/FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體alphaIgG100 ul
β-球蛋白phospho-Arhgef2 (Ser810)/FITC 熒光素標(biāo)記抗、大、Rho鳥苷酸交換因子2IgG100 ul
緩激肽B2受體Gelsolin/FITC 熒光素標(biāo)記凝溶膠蛋白IgG100µl
丁酰膽酯酶(N端)Gentamicin/FITC 熒光素標(biāo)記IgG100 ul
丁酰膽酯酶(C端)GFAP/FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)纖維酸性蛋白IgG20 ul
BLAMEGFP/FITC 熒光素標(biāo)記綠色熒光蛋白IgG100 ul
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