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貨號 | GOY-01X1266 |
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
公司細胞現(xiàn)貨供應,質量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
產品名稱 | 大鼠胰島β細胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細胞 |
貨號 | GOY-01X1266 |
商品介紹:
名稱 大鼠胰島β細胞 2.組織來源:胰腺組織 3.產品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介: 大鼠胰島β細胞分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質、脂肪和糖的作用。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成,胰島主要由4種細胞組成:α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細胞分泌胰島素,降低血糖;γ細胞分泌,以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌;PP細胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細胞,即胰島B細胞,是胰島細胞的一種,屬內分泌細胞的一種,能分泌胰島素,與胰島α細胞分泌的胰高血糖素一起起到調節(jié)血糖的作用。胰島B細胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足(胰島素抵抗),會使血糖升高,從而引發(fā)糖尿病。而胰島B細胞癌變會生成胰島素瘤,引起惡性血糖降低癥狀。 5.方法簡介: ()實驗室分離的大鼠胰島β細胞采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用逐級消化胰島制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: ()實驗室分離的大鼠胰島β細胞經Insulin含量檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R195 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
1 管 DH5α(pir)大腸桿菌 ER2566 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRevTR pRevTR 低溫運輸,-20℃保存
變形桿菌成套生化鑒定管(BXWS) BXWS 13種*1套/盒*10盒
2 ug pcDNA3.1(+)/RFP pcDNA3.1(+)/RFP 低溫運輸,-20℃保存
100次 植物種屬鑒定PCR Mix 4(質體 matK) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
100g 麥芽浸膏 Malt Extract 室溫陰涼干?嵌?L?
大鼠胰島β細胞NA平板(加青)(9cm) 英文名稱:Nutrient Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬髓過氧化物(MPO)免疫試劑盒*直銷
CIN-1瓊脂平板(9cm) 英文名稱:CIN-1 Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬水通道蛋白4(AQP-4)免疫試劑盒進口、組裝
含青TSA培養(yǎng)基平板(7cm) 英文名稱:Tryptose Soya Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬水通道蛋白1(AQP-1)免疫試劑盒進口、分裝
含青接觸皿培養(yǎng)基平板(5.5cm) 英文名稱:Contact Plate Medium 產品規(guī)格:10個/包 豬雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
TSA培養(yǎng)基平板(9cm) 英文名稱:TSA 產品規(guī)格:10個/包 豬輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷
RODAC培養(yǎng)皿(TSA)(55mm) 英文名稱:RODAC 產品規(guī)格:10個/包 豬瘦素(LEP)免疫試劑盒進口、組裝
改良Skirrow氏瓊脂平板(9cm) 英文名稱:Modified Skirrow Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬食欲素受體(OXR)免疫試劑盒進口、分裝
卵黃瓊脂平板(9cm) 英文名稱:Mannitol-Egg-Yolk-Polymyxin Agar Base 產品規(guī)格:10個/包 豬食欲素/阿立新B(OX-B)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
BCYE-CYS瓊脂平板(9cm) 英文名稱:BCYE-CYS Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬受體5(SSR5)免疫試劑盒*直銷
改良CCDA瓊脂平板(9cm) 英文名稱:Modified CCDA Agar 產品規(guī)格:10個/包 豬(SS)免疫試劑盒進口、組裝
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