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當(dāng)前位置：上海谷研實業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代紅胞>> CIK細(xì)胞
| 貨號 | GOY-01X1430 |
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
產(chǎn)品名稱 | CIK細(xì)胞 |
規(guī)格 | 1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 免疫細(xì)胞及干細(xì)胞 |
貨號 | GOY-01X1430 |
商品介紹：
名稱 CIK細(xì)胞 由于該細(xì)胞同時表達(dá)CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又稱為NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性，和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。該細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別能力很強(qiáng)，如同“細(xì)胞"，能精確“點射"腫瘤細(xì)胞，但不會傷及“無辜"的正常細(xì)胞。尤其對手術(shù)后或放化療后患者，能消除殘留微小的轉(zhuǎn)移病灶，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫力，因此，CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代的腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療的方案。 CIK細(xì)胞可以通過多機(jī)制抗腫瘤、抗病毒： 1.CIK細(xì)胞能以不同的機(jī)制識別腫瘤細(xì)胞，通過直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吐，釋放穿孔素、顆粒酶，實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的裂解； 2.CIK細(xì)胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多種炎性細(xì)胞因子，對腫瘤也有直接抑制作用； 3.CIK細(xì)胞可以通過配體-受體（Fas:FasL）介導(dǎo)的方式誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，因此CIK尤其適用于FasL陽性腫瘤的治療； 4.CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，有效激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使之趨于正常，提高病人自身抗腫瘤的能力。 目前，腫瘤的發(fā)生機(jī)制尚未形成普遍接受的理論。研究者普遍認(rèn)可腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關(guān)。即在正常情況下，腫瘤與機(jī)體的防御機(jī)能之間處于一種動態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞，就可能發(fā)生腫瘤。身體各組織細(xì)胞受到外界化學(xué)、物理、生物等因素刺激或自身細(xì)胞衰老變異等因素的影響，使得體內(nèi)某些細(xì)胞發(fā)生突變，成為癌前細(xì)胞；而機(jī)體免疫功能低下或者由于免疫異常，無法及時識別、殺傷、清除這些異常細(xì)胞，突變細(xì)胞在組織內(nèi)復(fù)制生長，達(dá)到一定數(shù)量后破壞器官功能，腫瘤即發(fā)生。腫瘤患者，尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能、特別是細(xì)胞免疫功能低下，因而疾病呈進(jìn)展、活動、預(yù)后差。因此，提高機(jī)體免疫力，建立有效的免疫應(yīng)答是治療腫瘤最有希望的途徑。CIK細(xì)胞治療即將大量殺傷性高、功能強(qiáng)、數(shù)量多的免疫活性細(xì)胞回輸患者體內(nèi)，直接發(fā)揮殺死腫瘤細(xì)胞的作用，并通過調(diào)節(jié)、激活患者的免疫體系，調(diào)動、提高患者自身的抗腫瘤能力。 CIK細(xì)胞具有以下突出的特點： 1.增殖速度快，殺瘤活性高。CIK細(xì)胞可以在體外大量擴(kuò)增，培養(yǎng)14天可以增殖200倍以上，其效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+的增殖可達(dá)1000倍以上，抗腫瘤活性得以大大增強(qiáng)。 2.殺瘤譜廣。CIK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷是非MHC限制的，對多種腫瘤細(xì)胞均有殺滅作用。 3.能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡。CIK細(xì)胞雖然在Fas被占據(jù)后會引起少量細(xì)胞凋亡，但對其殺瘤細(xì)胞毒性沒有明顯影響；反之，CIK細(xì)胞可以誘導(dǎo)FasL陽性腫瘤細(xì)胞的凋亡。 4.對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感。CIK細(xì)胞對放、化療敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性。 5.CIK細(xì)胞殺瘤活性不受CsA（A）和FK506（普樂可復(fù)）等免疫抑制劑的影響。 6.對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小，僅對紅系生成產(chǎn)生輕微的抑制，這可能與CIK細(xì)胞自身分泌高水平的IFN-γ有關(guān)。 7.CIK細(xì)胞具有識別腫瘤的機(jī)制，特異性強(qiáng)，對正常的細(xì)胞無毒性作用。 8.安全性好。CIK細(xì)胞是活化的患者自體細(xì)胞，應(yīng)用安全，不會產(chǎn)生排斥等反應(yīng)，患者副反應(yīng)小。 |
使用方法：
收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
D-阿拉伯糖-雙岐桿鑒定 20支
乳糖-雙岐桿鑒定 20支
松三糖-雙岐桿鑒定 20支
棉子糖-雙岐桿鑒定 20支
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棉子糖發(fā)酵管-O157生化鑒定 20支
葡萄糖（腦膜炎奈瑟氏專用） 20ml/支
CIK細(xì)胞麥康凱瓊脂3號 進(jìn)口、國產(chǎn)Maconkey Agar No.3用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)250山羊白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒*直銷
堿性瓊脂平板 進(jìn)口、國產(chǎn)Alkaline Agar用于分離霍亂弧菌250山羊白介素1α(IL-1α)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
堿性膽鹽瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn)Alkaline Bile Salt Agar用于分離霍亂弧菌250山羊白介素18(IL-18)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
胰膘肉湯基礎(chǔ) 進(jìn)口、國產(chǎn)Tryptose Broth Base用于肺炎鏈球菌、布魯氏菌屬細(xì)菌的培養(yǎng)100山羊白介素12(IL-12/P40)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豆粉瓊脂（血瓊脂基礎(chǔ)） 進(jìn)口、國產(chǎn)Blood Agar Base用于配制血瓊脂、巧克力瓊脂及亞碲酸鹽瓊脂250山羊白介素10(IL-10)免疫試劑盒*直銷
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細(xì)菌L型分離瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)用于L型細(xì)菌分離培養(yǎng)110山羊γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
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龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ)進(jìn)口、國產(chǎn)用于鼠疫桿菌的選擇性培養(yǎng)250山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒*直銷
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