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| 货号 | GOY-01X1260 |
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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 肾小管上皮细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1260 |
商品介绍：
名称 肾小管上皮细胞 2.组织来源：肾组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 人肾小管上皮细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。肾小管是机体肾脏器官上与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。肾小管按不同的形态结构、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和远端小管三部分；近端小管可分为直部和曲部，曲部也称为近曲小管，位于皮质迷路内，于肾小体附近高度蟠曲；远端小管曲部也称为远曲小管，位于皮质迷路内。肾小管上皮细胞是肾小管外面的一层细胞，肾小管上皮细胞的分离、培养是研究肾脏疾病的一项重要技术，目前该细胞分离方法有酶分离法、化学分离法筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法等。肾小管上皮细胞主要功能：①肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非营养物质进入终尿；③细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应；④移植肾炎症和新月体肾炎中PTEpiC表达IL-2R和MHC-Ⅱ类抗原，这说明肾小管上皮细胞参与肾免疫损伤的发生。随着对肾间质纤维化机制研究的日渐加深，肾小管上皮细胞（RTECs）在其中的作用日益被人们重视。因此，提供良好的肾小管上皮细胞模型，在肾小管间质疾病的发病机制和治疗药物筛选的研究中是非常重要的。 5.方法简介： ()实验室分离的人肾小管上皮细胞 采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的人肾小管上皮细胞 经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H193 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传1-2代左右 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
25U β －琼脂糖 β－Agarase -20℃保存
100mL TE Buffer,50X,pH7.4 TE Buffer,50X,pH7.4 常温保存
1 管 LBA4404农杆菌 LBA4404 Agrobacterium Strain -80℃保存
2 ug pSilencer 3.0-H1 pSilencer 3.0-H1 低温运输，-20℃保存
1次 96孔板病毒RNAout（真空法）
2 ug pCMV-Gag-pol pCMV-Gag-pol 低温运输，-20℃保存
快速硫化氢试验琼얾嵌쐛L⪀
肾小管上皮细胞LB肉汤颗粒 英文名称：LB Broth 产品规格：300ml/袋*10 猪胰高血糖素样肽2(GLP2)免疫试剂盒*直销
改良马丁琼脂培养基颗粒 英文名称：Martin Agar Medium, Modified 产品规格：250g 猪胰高血糖素样肽1(GLP1)免疫试剂盒进口、组装
胰蛋白胨大豆肉汤颗粒 英文名称：Tryptose Soya Broth 产品规格：250g 猪胰高血糖素(GC)免疫试剂盒进口、分装
胰蛋白胨大豆琼脂颗粒 英文名称：TSA Agar 产品规格：250g 猪胰淀粉α2(PAMY α2)免疫试剂盒现货供应
脑心浸出液肉汤（BHI）颗粒 英文名称：BHI Broth 产品规格：250g 猪胰岛素原(PI)免疫试剂盒*直销
大豆酪蛋白消化物培养基（USP）颗粒 英文名称：Soybean Casein Digest Medium 产品规格：250g 猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒进口、组装
10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤颗粒 英文名称：10% NaCl Trypticase Soy Broth 产品规格：250g 猪胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒进口、分装
麦康凯液体培养基（颗粒） 英文名称： 产品规格：250g 猪胰岛素样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒现货供应
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（颗粒） 英文名称： 产品规格：250g 猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒*直销
MUG培养基 英文名称：MUG Medium 产品规格：100g 猪胰岛素(INS)免疫试剂盒进口、组装
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