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微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶兩級(jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱為四級(jí)發(fā)酵。
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產(chǎn)品名稱 | 用途 | 貨號(hào) |
Aquibacillushalophilus | 僅供科研 | GOY-01J7457
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菌種的培養(yǎng):
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 [3] 。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍*的微生物保存法。
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Aquibacillushalophilus氟 Standard for GC ,≥99.6% (GC)小鼠抑制素A(INH-A)免疫試劑盒水通道蛋白-2抗體TrK A/NTRK1 酪氨激A抗體
氟 CP小鼠抑瘤素M(OSM)免疫試劑盒血管緊張素原抗體Trk A/B/C 酪氨激A/B/C抗體
氟 分析標(biāo)準(zhǔn)品小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)免疫試劑盒雄激素受體抗體TRIP1/PSMC5 狀腺受體相互作用蛋白1抗體
己丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫試劑盒死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)TRIP 腫瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體
己丁酯 ≥98%小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)免疫試劑盒軸蛋白1抗體Triosephosphate isomerase 糖異構(gòu)抗體
丁位十二內(nèi)酯 98%小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫試劑盒自噬相關(guān)蛋白9B抗體TRIM7/RNF90 糖原生成素相互作用蛋白抗體
丁乙酯 99%小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)免疫試劑盒自噬相關(guān)蛋白12抗體TRIM6/RNF89 環(huán)指蛋白89
異戊 98%小鼠乙酰輔A 免疫試劑盒自噬相關(guān)蛋白13抗體TRIM5α/RNF88 環(huán)指蛋白88抗體
異戊 Standard for GC,>99%(GC)小鼠乙酰酯(AChE)免疫試劑盒自噬相關(guān)蛋白3抗體TRIM50 TRIM50蛋白抗體
異戊 ≥97%,Kosher小鼠乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒整合素樣金屬蛋白與4型抗體TRIM47 星形瘤高表達(dá)蛋白抗體(環(huán)指蛋白100)
異丁異丁酯 98%小鼠乙酰(ACH)免疫試劑盒化活化復(fù)制因子2抗體TRIM41 環(huán)指蛋白調(diào)節(jié)蛋白激C蛋白抗體
己異丁酯 98%小鼠胰脂肪(PL)免疫試劑盒化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體TRIM36/RNF98 環(huán)指蛋白98抗體
丁酯 99%小鼠胰激肽原(PK)免疫試劑盒絲氨/蘇氨蛋白激ATR抗體TRIM35 TRIM35蛋白抗體
異丁酯 99%小鼠胰高血糖素樣肽2(GLP-2)免疫試劑盒去整合素樣金屬蛋白18抗體TRIM32 TRIM32抗體
異丁酯 ≥99%,Kosher小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)免疫試劑盒活化轉(zhuǎn)錄因子6抗體TRIM31 環(huán)指蛋白HCG1抗體
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