五月天伊人久久大香线蕉,AV无码精品久久不,久久久久久久综合日本

貨號(hào)	GOY-01X1424

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

產(chǎn)品名稱	大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞
規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類	原代細(xì)胞
貨號(hào)	GOY-01X1424

商品介紹：

名稱 大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞

2.組織來(lái)源：鞏膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜，后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù)。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復(fù)增厚。其與角膜交界處，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍(lán)色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結(jié)構(gòu)堅(jiān)韌，有支持和保護(hù)眼內(nèi)組織的作用。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

5.方法簡(jiǎn)介：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件貼壁不包被

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產(chǎn)品貨號(hào)CM-R323

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣

傳代特性可傳2-3代左右

消化液0.25%

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

使用方法：

收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
圖片13.jpg

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

豬P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-GP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬廣譜細(xì)胞角蛋白(P-CK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬白介素2受體β(IL-2Rβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬趨化因子CCL4樣蛋白1(CCL4L1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬金屬硫蛋白2 (MT2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬CD163分子(CD163)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬周期素依賴性激抑制因子3(CDKN3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬微精蛋白β(MSMβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬血小板衍生生長(zhǎng)因子受體樣蛋白(PDGFRL)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

豬著絲

大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞UBA　培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)UBA　Medium用于啤酒中厭氧菌檢測(cè)250山羊褪黑素(MT)免疫試劑盒*直銷

NBB　培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)NBB　Agar用于啤酒中厭氧菌檢測(cè)250山羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

Raka-Ray 培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Raka-Ray Medium用于啤酒中乳酸菌檢測(cè)和分離培養(yǎng)250山羊瘦素(LEP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

SCDLP液體培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth用于化妝品樣品制備，前增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Lecithin Tween 80 Nutrient Agar用于化妝品細(xì)菌總數(shù)測(cè)定（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊生長(zhǎng)激素(GH)免疫試劑盒*直銷

乙酰胺瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Acetamide Agar用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊三碘甲狀腺原(T3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

十六烷三甲基瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Cetrimide Agar用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Mannitol Medium生化試驗(yàn)培養(yǎng)基，用于細(xì)菌（如菌）發(fā)酵試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊醛固酮(ALD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

明膠培養(yǎng)基基礎(chǔ) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Gelatin Medium Base生化試驗(yàn)培養(yǎng)基，用于細(xì)菌明膠液化試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合1(前列腺素G / H合和環(huán)氧合)(PTGS1)免疫試劑盒*直銷

綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基(PDP) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)King Medium A 用于綠膿桿菌的綠膿菌素測(cè)定試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）250山羊前列腺素G/H合2(PTGS2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝