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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>進(jìn)口elisa試劑盒>>人elisa試劑盒>> 48T/96TPAI-1 elisa試劑盒說(shuō)明書
公司采用的全是進(jìn)口原材料研,發(fā)靈敏性高,高效性,*抗體,吸附均勻、吸附性好,回收利用率高、可靠性強(qiáng),無(wú)效包退包換,公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全,質(zhì)量可靠。
產(chǎn)品名稱 | PAI-1 elisa試劑盒說(shuō)明書 |
英文名稱 | PAI-1 elisa Kit |
貨號(hào) | GOY-H7667 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100µL,37°C孵育1小時(shí);
3. 吸棄,加檢測(cè)溶液A100µL,37°C孵育1小時(shí);
4. 洗板3次;
5. 加檢測(cè)溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
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樣品收集、處理及保存:
1).細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2)細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過(guò)反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測(cè)。
3)血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè)。
4)血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5)體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6.)組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
7)保存:如果樣品不能立即檢測(cè),應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37℃暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)吸光值。
PAI-1 elisa試劑盒說(shuō)明書操作步驟:
1)運(yùn)用前,將所有試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫,防止加樣時(shí)參加很多的氣泡,發(fā)生加樣上的差錯(cuò)。
2)依據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個(gè)規(guī)范品和空白孔主張做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自個(gè)的數(shù)量來(lái)定,能運(yùn)用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3)參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測(cè)樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動(dòng)30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
5)每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動(dòng)30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
7)每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8)取出酶標(biāo)板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測(cè)定成果。
9)在450nm波利益測(cè)定各孔的OD值。
全組織琥珀酸脫氫酶活性染色 OAS3(2′-5′-oligoadenylate synthase 3) 20 ul
冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色 PRDX6(Peroxiredoxin-6) 100 ul
全組織細(xì)胞色素C氧化酶活性染色 TTN(Titin) 100 ul
冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶(Combined COX-SDH)雙酶活性染色 FSCN1(Fascin) 500 ul
全組織細(xì)胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶(Combined COX-SDH)雙酶活性染色 TPI1(Triosephosphate isomerase) 100 ul
冰凍切片NADH心肌黃酶和琥珀酸脫氫酶(Combined NADH-TR-SDH)雙酶活性染色 RNASE3/ECP(Ribonuclease A3/Eosinophil Cationic Protein) 100µl
全組織NADH心肌黃酶和琥珀酸脫氫酶(Combined NADH-TR-SDH)雙酶活性染色 PDXK(Pyridoxal kinase) 100 ul
冰凍切片酸性磷酸酶活性染色 POMGNT1(Protein O-linked-mannose beta-1,2-N-acetylglucosaminyltransferase 1) 20 ul
全組織酸性磷酸酶活性染色 HMGCS1(Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase, cytoplasmic) 100 ul
冰凍切片酰膽堿脂酶活性染色 GDF2(Growth/differentiation factor 2) 100 ul
全組織酰膽堿脂酶活性染色 OSMR(Oncostatin-M-specific receptor subunit beta) 100 ul
冰凍切片肌腺苷酸脫氨酶(Myoadenylate deaminase)活性染色 OIT3(Oncoprotein-induced transcript 3 protein) 100 ul
全組織肌腺苷酸脫氨酶(Myoadenylate deaminase)活性染色 DEFA5(Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) 100 ul
冰凍切片非特異性酯酶(Non-specific esterase)活性染色 CTSG(Cathepsin G) 100 ul
全組織非特異性酯酶(Non-specific esterase)活性染色 PRKAB1(5′-AMP-activated protein kinase subunit beta-1) 100 ul
冰凍切片肌肉磷酸化酶(Myophosphorylase)活性染色 GNRHR(Gonadotropin-releasing hormone receptor) 100 ul
H2S硫化氫種屬: Nidula│niveotomentosa白絨紅蛋巢
heparan sulfate硫酸類肝素種屬: Streptomyces│cyaneus藍(lán)色鏈霉菌
CSGALNACT1硫酸軟骨素N-乙酰半乳糖轉(zhuǎn)移酶-1種屬: Dictyophora│duplicate var. northeastensis短裙竹蓀東北變種
Dehydroepiandrosterone sulfate硫酸脫氫表雄酮種屬: Azorhizobium caulinodansDSM5975
heparanase硫酸乙酰肝素種屬: Sphingobium│sp.鞘氨醇菌屬
heparanase硫酸乙酰肝素酶種屬: Theileria│sergenti瑟氏泰勒蟲(chóng)(清水株)
Sulfotransferase硫酸轉(zhuǎn)移酶種屬: Ganoderma│applanatum (Pers.) Pat.#樹(shù)舌
thioredoxin reductase硫氧還蛋白還原酶種屬: Mycena│pura (Pers.) P. Kumm.潔小菇
Thioredoxin Interacting Protein硫氧還蛋白相互作用蛋白種屬: Theileria│sergenti瑟氏泰勒蟲(chóng)
Thioredoxin硫氧化還原蛋白種屬: Nocardiopsis│sp.擬諾卡菌屬菌株
Egg albumin卵白蛋白種屬: Alternaria│tenuissima var. alliicola細(xì)極鏈格孢蒜生變種
ovarian cancer marker-CA125卵巢癌抗原種屬: Agrobacterium│gelatinovorum食明膠土壤桿菌
Lecithin-Cholesterol Acyltransferase卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶種屬: Ganoderma│lucidum赤芝
Follistatin卵泡抑素種屬: Pusillimonas│harenae沙極小單胞菌
ovalbumin specific IgE卵清蛋白特異性IgE種屬: Paecilomyces│millitaris蛹草擬青霉
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