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對(duì)于間接elisa定量檢測(cè)試劑盒標(biāo)本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準(zhǔn)就會(huì)造成誤差,尤其當(dāng)稀釋倍數(shù)大時(shí),很小的誤差,會(huì)導(dǎo)致較大的相對(duì)誤差,使陰性(或弱陽(yáng)性)標(biāo)本呈陽(yáng)性(或陰性)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統(tǒng)處理標(biāo)本,可較好地避免以上誤差。
洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。無(wú)論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
溫育
每種都有其反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),會(huì)造成整板本底高,陽(yáng)性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
酶標(biāo)儀判讀
作為記錄測(cè)定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對(duì)濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置要正確,使用雙波長(zhǎng),一個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng),一個(gè)參比波長(zhǎng),以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)
綜上所述,由于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上缺乏標(biāo)準(zhǔn)化,盡管目前上以及我國(guó)有了部分標(biāo)準(zhǔn)血清或參比血清(血清盤(pán))。但由于elisa定量檢測(cè)試劑盒受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,在酶聯(lián)吸附測(cè)定中有時(shí)不可避免的會(huì)出現(xiàn)一定的非特異性,但我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至低限底,從而提高檢測(cè)的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
HPLC≥98% 光甘草定 20mg/支 Glabridin
HPLC≥98% 橙黃決明素 20mg/支 aurantio-obtusin
HPLC≥98% 荷葉堿 20mg/支 Nuciferine
HPLC≥99% 鷹嘴豆芽素A 20mg/支 Biochanin A
HPLC≥99% 10-羥基喜樹(shù)堿 20mg/支 10-hydroxycamptothecin
≥99% 可可堿 20mg/支 Theobromine
95% D-松醇 20mg/支 D-Pinitol
HPLC≥98% 常春藤皂苷元 20mg/支 Hederagenin
HPLC≥98% 花椒毒素 20mg/支 8-Methoxypsoralen
HPLC≥98% 白花前胡醇 20mg/支 Peucedanol
elisa定量檢測(cè)試劑盒
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