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脆弱擬桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
膜粘連蛋白11抗體
膜粘連蛋白13抗體
磷酸化促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
酸性神經(jīng)酰胺酶1抗體
粘附調(diào)節(jié)分子1抗體
氣味結(jié)合蛋白抗體
乙醛脫氫酶2抗體
膜粘連蛋白10抗體
前梯度同源蛋白2抗體
乙醛脫氫酶5抗體
通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子抗體
自噬相關(guān)蛋白4D抗體
自噬相關(guān)蛋白9A抗體
醛縮酶C抗體
谷草轉(zhuǎn)氨酶抗體
三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員5抗體
三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員8抗體
磷酸化細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體
轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白3抗體
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