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組蛋白賴氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶SETD7試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
半乳糖凝集素9B(GAL9B)重組蛋白
半乳糖凝集素9C(GAL9C)重組蛋白
胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重組蛋白
胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白
苯酚磺基轉(zhuǎn)移酶(PST)重組蛋白
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)重組蛋白
表皮生長(zhǎng)因子(EGF)重組蛋白
表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)重組蛋白
丙氨酸氨肽酶(AAP)重組蛋白
丙酮酸激酶(PK)重組蛋白
丙酮酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白
丙酮酸脫氫酶磷酸酶(PDP)重組蛋白
波形蛋白(VIM)重組蛋白
玻連蛋白(VTN)重組蛋白
補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)重組蛋白
補(bǔ)體成分1r(C1r)重組蛋白
補(bǔ)體成分2(C2)重組蛋白
補(bǔ)體成分3(C3)重組蛋白
補(bǔ)體成分4a(C4a)重組蛋白
補(bǔ)體成分7(C7)重組蛋白
補(bǔ)體受體2(CR2)重組蛋白
補(bǔ)體因子H(CFH)重組蛋白
補(bǔ)體應(yīng)答基因32(RGC32)重組蛋白
不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)重組蛋白
層粘連蛋白α1(LAMα1)重組蛋白
層粘連蛋白β1(LAMβ1)重組蛋白
層粘連蛋白受體1(LAMR1)重組蛋白
叉頭框蛋白O1(FOXO1)重組蛋白
叉頭框蛋白O3(FOXO3)重組蛋白
腸堿性磷酸酶(ALPI)重組蛋白
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