大鼠纖維母細胞;1/EJ 1-1操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。
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