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elisa定量檢測試劑盒操作步驟和樣本處理要點

時間:2017/4/18閱讀:520
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elisa定量檢測試劑盒操作步驟:

1.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
3.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
5.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
6.溫育:操作同3。
7.洗滌:操作同5。
8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

elisa定量檢測試劑盒樣本處理

1.血清:
標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過液后于1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.細(xì)胞培養(yǎng)物上清:
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標(biāo)本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.組織勻漿:
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過液,再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。
4.血漿:
ELISA試劑盒可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘,小鼠ELISA試劑盒或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
5.尿液:
無菌收集取初尿,離心除去沉淀物,即可用于檢測,要長期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長期保存elisa定量檢測試劑盒。

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