客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

產(chǎn)品名稱：5-異硫氰酸熒光素尸胺

規(guī)格：5 mg

貨號：BJP1252

分類：熒光核酸試劑

產(chǎn)品僅用于科研儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

染料法

探針法　

可進(jìn)行相對，定量表達(dá)分析，定性分析，SNP檢測等

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

·電泳圖   ·標(biāo)準(zhǔn)曲線 

·溶解曲線 ·擴(kuò)增曲線

·完整的實(shí)驗(yàn)過程、試劑、儀器及分析報(bào)告

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：

aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。

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檢測步驟：

一、 試劑的準(zhǔn)備

從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。

設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量

熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

總量 15 µL N×15µL

（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。

7.2 qPCR反應(yīng)條件

將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。

推薦循環(huán)條件:

1循環(huán) 50℃ for 2 min

預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min

PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

大鼠食管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書SignalSilence® PAK2 siRNA I300 ul

小鼠淋巴成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基價(jià)格SignalSilence® FoxO1 siRNA I (Mouse Specific)100 ul

小鼠腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul

小鼠尿道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基現(xiàn)貨供應(yīng)MLANA/MART-1 (E9Q4O) XP® Rabbit mAb20 ul

MEM（不含L-谷氨酰、非必需氨基酸）報(bào)價(jià)MLANA/MART-1 (E9Q4O) XP® Rabbit mAb300 ul

DMEM低糖 （含HEPES）現(xiàn)貨供應(yīng)SignalSilence® Bad siRNA I100 ul

（R型）原人參二醇實(shí)驗(yàn)步驟Wee1 (D10D2) Rabbit mAb (PE Conjugate)300 ul

貝母素乙18059-10-4*SignalSilence® FAK siRNA I1 Kit

扁塑藤素1258-84-0實(shí)驗(yàn)方法PathScan® Phospho-FGF Receptor 3 (panTyr) Chemiluminescent Sandwich  Kit300 ul

丹酚酸B115939-25-8 *SignalSilence® Ezrin siRNA I100µg

黃柏酮751-03-1實(shí)驗(yàn)步驟F4/80 (BM8.1) Rat mAb (PE Conjugate)300 ul

劍麻皂苷元77-60-1 ?實(shí)驗(yàn)方法SignalSilence® Tuberin/TSC2 siRNA I100µg

硫辛酸62-46-4 *MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2) Rat mAb (APC Conjugate)300 ul

麥冬皂甙B38971-41-4實(shí)驗(yàn)步驟SignalSilence® Cyclin D1 siRNA II (Mouse Specific)100 ug

人參皂苷Rh4 174721-08-5實(shí)驗(yàn)方法CD8α (2.43) Rat mAb (APC Conjugate)100 ul

異類葉升麻苷61303-13-7實(shí)驗(yàn)方法EphA7 (D1C3K) Rabbit mAb300 ul

（R型）人參皂苷Rg2 80952-72-3 實(shí)驗(yàn)步驟SignalSilence®EGF Receptor siRNA I1 Kit
5-異硫氰酸熒光素尸胺Aspergillus│niger斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 甘蔗糖蜜淺盤發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法；其他

Streptomyces│sp.分離基物: 土壤凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Pichia│pastoris斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 高效表達(dá)、分泌、生產(chǎn)葡聚糖酶培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum分離基物: 泡菜(蘿卜,白菜)凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 發(fā)酵制泡菜、果蔬制品、飼料等。培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法；定期移植法

Helicobacter│pylori分離基物: 胃標(biāo)本凍結(jié)物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0021生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Verticillium│sinense分離基物: 土壤斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

Phytophthora│infestans (Mont.) de Bary分離基物: 馬鈴薯病葉斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 19存儲條件: 定期移植法

Pseudomonas│putida凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 抗重金屬特性研究培養(yǎng)基: 33生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Paenibacillus│polymyxa分離基物: 土壤凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 紅麻、亞麻脫膠，24小時(shí)脫膠程度為7培養(yǎng)基: 0014生長條件: 34℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法
操作程序：

由您提供該實(shí)驗(yàn)中目的基因的相關(guān)資料（如：基因名稱、序列等信息），我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線；

商定服務(wù)收費(fèi)、付款方式、服務(wù)期限等，并簽定技術(shù)服務(wù)合同。

有您提供實(shí)驗(yàn)所需的足夠量的實(shí)驗(yàn)樣本（100mg組織或107個(gè)細(xì)胞），本公司不接受您提供的RNA樣本

PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供，也可以委托本公司設(shè)計(jì)合成（費(fèi)用另計(jì)）。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探針。

我們進(jìn)行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴(kuò)增、數(shù)據(jù)分析。

產(chǎn)品僅用于科研提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括實(shí)驗(yàn)過程、所用儀器試劑、擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。