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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
產(chǎn)品僅用于科研在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學性狀相似的實驗對象
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公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱:人十二脂腸腺癌
產(chǎn)品英文代號:HUTU-80
細胞培養(yǎng)條件:MEM+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
運費基數(shù):活細胞包郵/凍存100-400元干冰費
穩(wěn)定貨期(是or否): 是
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×106 |
貨號 | BJX6445 |
細胞培養(yǎng)及傳代:
<1>細胞培養(yǎng)
產(chǎn)品僅用于科研細胞請于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細胞是37℃,5% CO2,濕度環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細胞培養(yǎng)條件不行,請仔細閱讀相應(yīng)的細胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
細胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標注的細胞相應(yīng)*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
細胞培養(yǎng)至密度達80%以上時即可傳代,先將細胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
3min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;
若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
將細胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細胞內(nèi)會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細胞或者細胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細胞1周換液2-3次即可。
細胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細胞用PBS漂洗兩次、懸浮細胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細胞碎片甚至導(dǎo)致細胞死亡的風險。
細胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調(diào)整細胞狀態(tài)及生長速度。
請不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒炐枰梢灾鸩今Z化。
懸浮傳代:混勻細胞,收集細胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。 ?
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線。
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細胞步驟: 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
纖溶酶原(Plg)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 瓜果腐霉 1g
纖維蛋白肽A(FPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 5g
?;碳さ鞍?ASP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 優(yōu)美氈被菌 10MG
角蛋白19(KRT19)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 黃色刺孢鏈霉菌 100g
角蛋白20(KRT20)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 克羅諾桿菌屬 25g
Kruppel樣因子4(KLF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 嗜熱側(cè)孢霉 5g
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白A1(ABCA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) (D3, 98%) 羅倫隱球酵母 10g
利鉀尿肽(KP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) (D3, 98%) 開菲爾乳桿菌 5g
心型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 畢赤酵母 1g
TGFβ誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1(TIEG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 解淀粉芽孢桿菌 5g
胸腺表達趨化因子(TECK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 冠突曲霉 1g
雄激素受體(AR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 廈門交替紅色桿菌 5g
TGFβ誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1(TIEG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 喜濕小脆柄菇 1g
血管抑素(ANG)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 粘紅酵母 25g
延伸蛋白A(ELOA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 根瘤菌 5g
基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 美澳型核果褐腐病菌 1g
26S-蛋白酶體(26S-PSM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 節(jié)桿菌 100g
谷氨酸脫羧酶2(GAD2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 魯氏毛霉 1g
人十二脂腸腺癌說明書人表皮角質(zhì)形成細胞HumanSkin:NormalEpidermalKeratinocytes 產(chǎn)品描述:公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-159℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒DNMT3L (E1Y7Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)100 ul
大鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒HYOU1 Antibody100 ul
大鼠血管生長素(ANG)ELISA試劑盒Lmx1B (D1E2) Rabbit mAb100 ul
大鼠雄烯二酮(ASD)ELISA試劑盒CHD1L (E1I8C) Rabbit mAb100 ul
大鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒Phospho-Akt1 (Ser129) (D4P7F) Rabbit mAb100 ul
大鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)100 ul
大鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒XPF (D3G8C) Rabbit mAb100 ul
大鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒Sec31A (D1G7I) Rabbit mAb100 ul
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