免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
PALCAM Listeria selective-Suppleme acc.to van Netten et al PALCAM人膀胱平滑肌細(xì)胞cDNA3-乙烯基酸AU1 tag peptide  AU1 tag標(biāo)簽多肽

李斯特氏菌選擇添加劑人尿道上皮細(xì)胞cDNA3-乙烯基酸Glu-Glu Tag peptide  Glu-Glu Tag多肽蛋白

L-PALCAM-Listeria selective enrichme broth( base) acc.van Netten et al. L-PALCAM 李斯特氏菌選擇富集肉湯（基礎(chǔ)）人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞cDNA3-乙烯基酸CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2)  環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原

Peptone water( buffered) 緩沖蛋白胨水人前列腺上皮細(xì)胞cDNA鹽酸金剛乙胺CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase)  C型鈉尿肽抗原

Phenol-re broth( base) 酚紅肉湯（六亞）人前列腺成纖維細(xì)胞cDNA鹽酸金剛乙胺CF(Ciliary Neurotrophic Factor)  睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗原

Plate cou agar Casein-peptone dextrose yeast extract agar人前列腺平滑肌細(xì)胞cDNA3-基酸factor V(Vcoagulation factor)  凝血因子5

平板計(jì)數(shù)瓊脂/酪蛋白右旋糖酵母瓊脂人顱骨造骨細(xì)胞cDNA3-基酸Collagen III (Ai-Collagen Type III )  抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)

Plate cou skim milk agar平板計(jì)數(shù)脫脂乳瓊脂人滑膜細(xì)胞cDNA3-基酸Collagen III (Ai--Collagen Type III )  Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)

IL-15/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白752,4-二氟溴Rat TRF (Transferrin) 檢測試劑盒

IL-15R Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記白介素15受體αIgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白654-氯-3-氟酚Rat VLDL (Very Low Density Lipoprotein) 檢測試劑盒

IL-16/FITC   熒光素標(biāo)記白細(xì)胞介素-16IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白1574-氯-3-氟酚Rat SDH (Succinate Dehydrogenase) 檢測試劑盒

IL-16/FITC  熒光素標(biāo)記白介素16IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90B4-氯-3-氟酚Rat F1+2 (Prothrombin Fragme 1+2) 檢測試劑盒

IL-17/FITC  熒光素FITC標(biāo)記白介素-17IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A4-氯-2-氟酚Rat VASP (Vasodilator Stimulated Phosphoprotein) 檢測試劑盒

IL-17B/FITC  熒光素標(biāo)記白介素-17BIgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白1044-氯-2-氟酚Rat DNMT3A (DNA Methyltransferase 3A) 檢測試劑盒

IL-17/PE  熒光素PE標(biāo)記白介素-17IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白12子種綠ARat VAP-1 (Vascular Adhesion Protein 1) 檢測試劑盒

IL-17R/IL-17RA/CD217/FITC  熒光素標(biāo)記白介素17受體IgG卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白67子種綠ARat ApoA1 (Apolipoprotein A1) 檢測試劑盒
周期素E抗體腸炎沙門氏Mouse TCF20 (Transcription Factor 20)  Kit  

大腸桿Mouse RB (V-R Reticuloendothiosis Viral Oncogene Homolog B)  Kit

弗氏志賀氏Mouse TRF (Transferrin)  Kit

地衣芽胞桿Mouse TFR2 (Transferrin Receptor Protein 2)  Kit   

產(chǎn)色鏈霉Mouse TFR (Transferrin Receptor)  Kit

黃曲霉Mouse TGFbI (Transforming Growth Factor Beta Induced)  Kit  

蠟狀芽孢桿Mouse TGF-α (Transforming Growth Factor α)  Kit

尖孢鐮刀Mouse TGFb2 (Transforming Growth Factor Beta 2)  Kit