當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞培養(yǎng)>> 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞規(guī)格
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟: 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱:人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
產(chǎn)品英文代號:SK-N-SH
細(xì)胞培養(yǎng)條件:MEM+10%FBS+1%NEAA+1%L-谷氨酰胺+1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定:提供STR鑒定報(bào)告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運(yùn)輸溫度(℃):常溫
運(yùn)費(fèi)基數(shù):活細(xì)胞包郵/凍存100-400元干冰費(fèi)
穩(wěn)定貨期(是or否): 是
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×106 |
貨號 | BJX6556 |
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細(xì)胞培養(yǎng)及傳代:
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞請于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細(xì)胞是37℃,5% CO2,濕度環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不行,請仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細(xì)胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代,先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
3min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;
若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
將細(xì)胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細(xì)胞在傳代后時(shí),會有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時(shí),可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí),貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細(xì)胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時(shí)候,可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
請不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒?yàn)需要,可以逐步馴化。
懸浮傳代:混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。 ?
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對象是活細(xì)胞
產(chǎn)品僅用于科研在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對象
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線。
花生四烯酸-5-脂加氧酶(ALOX5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 蓖麻油鑒別試劑 5g
ⅡD組磷脂酶A2(PLA2G2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 紅淡紫灰鏈霉菌 1g
胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 麥芽糖假絲酵母 5g
血幼素(HJV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 90% 中國臺灣無色需堿菌 100g
轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 90% 細(xì)極鏈格孢 25g
白蛋白(ALB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 90% 葉生布勒擔(dān)子酵母 500g
組蛋白H3(H3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 谷氨酸棒桿菌 1g
多配體蛋白聚糖1(SDC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 大腸埃希氏菌 25g
載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 柔嫩艾美耳球蟲 5g
載脂蛋白D(APOD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% Methylobacterium variabile 25g
補(bǔ)體成分5(C5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 金耳 5g
血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶1(ADAMTS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% DB (彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞) (通過STR鑒定) 1g
補(bǔ)體成分8γ(C8γ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 炭疽芽胞桿菌 5g
血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶7(ADAMTS7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% *蛹蟲草 1mg
蛋白S(PROS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 離中不粘柄菌 1g
色素上皮衍生因子(PEDF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 海洋沉積物芽孢桿菌 5g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白B(SPB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 彎曲假單胞菌 250mg
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白C(SPC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 果生鏈核盤菌 25g
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞規(guī)格大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞RatAorta:NormalAorticEndothelialCells 產(chǎn)品描述:公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-273℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒Phospho-Lamin A/C (Ser22) Antibody100 ul
小鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA試劑盒IRP1 (D6S4J) Rabbit mAb100 ul
小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒MCP-1 Antibody100 ul
猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒SirT1 Antibody (Mouse Specific)100 ul
猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒Grp94 (D6X2Q) XP® Rabbit mAb20 ul
猴子巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒Grp94 (D6X2Q) XP® Rabbit mAb100 ul
猴白介素6(IL-6)ELISA試劑盒MCP-1 Antibody (Mouse Specific)100 ul
猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒SRC-1 (D1M3Y) Rabbit mAb100 ul
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溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。