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細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟: 將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱:鴨胚胎成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品英文代號:Duck embryo
細(xì)胞培養(yǎng)條件:D/F12+10%FBS+1%p/s+0.005mg/ml胰島素+5ng/mlBfGF+1ug/ml氫化+50ug/ml抗壞血酸(維C)+7.5mM L-Gln (推薦:PriMed-西格-003)
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細(xì)胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
運費基數(shù):活細(xì)胞包郵/凍存100-400元干冰費
穩(wěn)定貨期(是or否): 是
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×106 |
貨號 | BJX6718 |
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細(xì)胞培養(yǎng)及傳代:
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞請于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),大部分細(xì)胞是37℃,5% CO2,濕度環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不行,請仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書,使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件;
細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng),加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基(一般液面高度2-3mm即可)。
<2>細(xì)胞傳代(以下步驟適用于10cm皿)
細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時即可傳代,先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好,其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄;
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS,輕輕晃動皿,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍棄;
加入1mL胰酶,輕輕晃動皿,使胰酶浸沒到皿底所有部位,將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化;
3min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞不再貼壁,即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻;
若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止;
將細(xì)胞懸液均勻分成幾份,分別加入不同培養(yǎng)皿中,補加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細(xì)胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時,可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式,不要頻繁換液,大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
細(xì)胞碎片較多、背景較臟時,貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心(900rpm,3min)能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3,長得比較快的細(xì)胞可以1:3,比較慢的按1:2傳代。傳代后,建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基,會有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險。
細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時候,可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
請不要隨意更換培養(yǎng)基,因?qū)嶒炐枰梢灾鸩今Z化。
懸浮傳代:混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗一次。 ?
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
產(chǎn)品僅用于科研在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線。
著絲粒蛋白32(CENP32)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 100g
癌/抗原62(CTAG62)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 燕麥鐮孢 25g
Sugen激酶071(SGK071)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g
Ashwin蛋白(Ash)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 厚環(huán)乳牛肝菌 100g
蛋白C10(C10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 拜耳接合酵母 25g
B-黑色素瘤抗原5(BAGE5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 米根霉 5g
著絲粒蛋白36(CENP36)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 多育曲霉 1g
可溶性半乳糖苷結(jié)合凝集素16(LGALS16)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 流產(chǎn)布魯氏菌 生物Ⅰ型 5g
內(nèi)切核酸酶V(ENDOV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 香菇 1g
Kazrin蛋白(KAZN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 假單胞菌 1g
前庭蛋白1(VEST1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 約氏乳桿菌 25g
殺傷蛋白(KLLN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌 5g
胰蛋白酶X3(TRYX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 平菇 1g
Whirlin蛋白(WHRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 灰葡萄孢 1g
皮卡丘素(Pikachurin)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 拉曼傘狀霉 10MG
血色病蛋白(HFE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 1g
微腦磷脂1(MCPH1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 中國葡萄座腔菌 5g
型胱胺酸癥蛋白(CTNS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 茶擬莖點霉 1g
鴨胚胎成纖維細(xì)胞價格人子宮癌組織源Human Cancer: Uterine CancerTissues CellsDerivatives人子宮癌組織源細(xì)胞提取物是從人原代子宮癌組織源細(xì)胞提取的,人原代子宮癌組織源細(xì)胞從人子宮癌組織制備。子宮癌組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA試劑盒Androgen Receptor Antibody100 ul
人抗中性粒細(xì)胞抗體(ANA)ELISA試劑盒 CDK9 (C12F7) Rabbit mAb (PE Conjugate)100 ul
人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb20 ul
人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)ELISA試劑盒 Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb100 ul
人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)ELISA試劑盒 Pyruvate Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb20 ul
人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)ELISA試劑盒 Pyruvate Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb100 ul
人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒 GPX1 Antibody100 ul
人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒AMACR (2A10) Mouse mAb100 ul
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