細(xì)胞凍存步驟： 
   待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復(fù)蘇細(xì)胞步驟：    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱：豬腎細(xì)胞
產(chǎn)品英文代號(hào)：PK-15

細(xì)胞培養(yǎng)條件：MEM+10%FBS+1%P/S  

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

運(yùn)費(fèi)基數(shù)：活細(xì)胞包郵/凍存100-400元干冰費(fèi)

穩(wěn)定貨期（是or否）：     是

?

細(xì)胞培養(yǎng)及傳代：
<1>細(xì)胞培養(yǎng)
產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞請(qǐng)于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，大部分細(xì)胞是37℃，5% CO2，濕度環(huán)境下培養(yǎng)的。有極少部分細(xì)胞培養(yǎng)條件不行，請(qǐng)仔細(xì)閱讀相應(yīng)的細(xì)胞說明書，使用正確的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件；
細(xì)胞于培養(yǎng)瓶或皿中培養(yǎng)，加入適量說明書上標(biāo)注的細(xì)胞相應(yīng)*培養(yǎng)基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>細(xì)胞傳代（以下步驟適用于10cm皿）
細(xì)胞培養(yǎng)至密度達(dá)80%以上時(shí)即可傳代，先將細(xì)胞培養(yǎng)基取出3mL用15mL離心管裝好，其他培養(yǎng)基全部吸干舍棄；
培養(yǎng)皿加入2-3mL無菌PBS，輕輕晃動(dòng)皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍棄；
加入1mL胰酶，輕輕晃動(dòng)皿，使胰酶浸沒到皿底所有部位，將皿蓋好放入培養(yǎng)箱中消化；
3min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞不再貼壁，即可加入*步收集的培養(yǎng)基混勻；
若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至不貼壁為止；
將細(xì)胞懸液均勻分成幾份，分別加入不同培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
<3>相關(guān)問題
部分細(xì)胞在傳代后時(shí)，會(huì)有以下現(xiàn)象：細(xì)胞內(nèi)會(huì)有黑色小點(diǎn)、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞或者細(xì)胞長的極慢。出現(xiàn)以上現(xiàn)象時(shí)，可以咨詢本公司技術(shù)人員此現(xiàn)象是否正常及相關(guān)處理方式，不要頻繁換液，大多數(shù)細(xì)胞1周換液2-3次即可。
細(xì)胞碎片較多、背景較臟時(shí)，貼壁細(xì)胞用PBS漂洗兩次、懸浮細(xì)胞打散后低速離心（900rpm，3min）能有效改善。
傳代比例建議1:2-1:3，長得比較快的細(xì)胞可以1：3，比較慢的按1:2傳代。傳代后，建議不要使用傳代前培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基，會(huì)有大量細(xì)胞碎片甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
細(xì)胞狀態(tài)不好或者生長極慢的時(shí)候，可以通過增加血清濃度調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)及生長速度。
請(qǐng)不要隨意更換培養(yǎng)基，因?qū)嶒?yàn)需要，可以逐步馴化。
懸浮傳代：混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液900-1000rpm離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞，再離心后，用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗一次。 ?

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
產(chǎn)品僅用于科研在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備 
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)
可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線。
Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　豇豆慢生根瘤菌　1g

Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　釀酒酵母　5g

表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　蠟狀芽孢桿菌　100mg

白介素25(IL25)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　弗氏志賀氏菌　1g

可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　50%水溶液,含0.1 %甲酸穩(wěn)定劑　美澳型核果褐腐病菌　100g

ⅩⅤ型膠原(COL15)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　50%水溶液,含0.1 %甲酸穩(wěn)定劑　藤黃微球菌　500g

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1(ECM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　BF3:17.5 - 19.0 %　單核增生李斯特CMCC(B)54002　100ml

封閉蛋白3(CLDN3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　綠穗霉　25g

封閉蛋白5(CLDN5)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　尼氏芽孢桿菌　5g

多胺調(diào)節(jié)因子1結(jié)合蛋白1(PMFBP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　漢遜德巴利酵母fabryi變種　1g

載脂蛋白O(APOO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　香菇(泌陽3號(hào))　5g

纖維鞘相互作用蛋白1(FSIP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　球孢白僵菌　100g

連接附著分子3(JAM3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　平臍蠕孢菌　25g

連接附著分子1(JAM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　空泡極單胞菌　5g

中間絲蛋白(SYNC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　產(chǎn)氣腸桿菌（現(xiàn)1）　25g

抵抗素樣蛋白β(RETNLβ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　96%　布魯氏菌　5g

毒蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　AR,98%　不規(guī)則鹽海菌　1g

毒蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　AR,98%　金針菇（毛柄金錢菌、冬菇）　25g
豬腎細(xì)胞廠家人腦動(dòng)脈血管平滑肌Human Brain: Normal Cerebral Artery Vascular Smooth Muscle Cells Derivatives人腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞提取物是從人原代腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞提取的，人原代腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞從正常人腦動(dòng)脈血管平滑肌組織制備。正常人腦動(dòng)脈血管平滑肌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

人B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒 Phospho-Met (Tyr1349) (130H2) Rabbit mAb100 ul

人天青殺素(AZU)ELISA試劑盒 α-Actinin Antibody100 ul

人疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb20 ul

人抗鈣蛋白酶抑素抗體(AT-DⅣ)ELISA試劑盒Phospho-Met (Tyr1003) (13D11) Rabbit mAb100 ul

人抗菌肽(Att)ELISA試劑盒 CDK6 (DCS83) Mouse mAb20 ul

人心鈉肽(ANP)ELISA試劑盒CDK6 (DCS83) Mouse mAb100 ul

人心納素(ANF)ELISA試劑盒 Phospho-Ack1 (Tyr284) Antibody100 ul

人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2(ABCG2)ELISA試劑盒Acidic FGF (11H11) Rabbit mAb100 ul