大鼠肺泡巨噬细胞规格 返回列表页

细胞冻存步骤： 
   待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤：    将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
公司产品仅用于科研
产品名称：大鼠肺泡巨噬细胞
产品英文代号：NR8383

细胞培养条件：F12K+15%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%P/S

生长状态：悬浮+贴壁（少量）生长

产品规格：1×106

单位：T25/瓶

是否提供细胞STR鉴定：不提供STR鉴定报告

保存培养温度（℃）：37

运输温度（℃）：常温

运费基数：活细胞包邮/冻存100-400元干冰费

稳定货期（是or否）：     是

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细胞培养及传代：
<1>细胞培养
产品仅用于科研细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不行，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；
细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应*培养基（一般液面高度2-3mm即可）。
<2>细胞传代（以下步骤适用于10cm皿）
细胞培养至密度达80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；
培养皿加入2-3mL无菌PBS，轻轻晃动皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；
加入1mL胰酶，轻轻晃动皿，使胰酶浸没到皿底所有部位，将皿盖好放入培养箱中消化；
3min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞不再贴壁，即可加入*步收集的培养基混匀；
若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；
将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。
<3>相关问题
部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。
悬浮传代：混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用*培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗一次。 ​

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
产品仅用于科研在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象
操作流程：
1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。
墨蝶呤还原酶(SPR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　≥97%　小果豆包菌　5g

序列相似家族135成员B(FAM135B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　恶臭假单胞菌　1g

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　噬果胶黄杆菌　5g

分泌粒蛋白Ⅴ(SCG5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　酿酒酵母　100g

烟碱型胆碱受体α5(CHRNα5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　顶青霉　25g

生长分化因子2(GDF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　梨红菇　5g

含卷曲螺旋C2域蛋白1A(CC2D1A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　≥95%　环状芽孢杆菌　25mg

锌结合α2-糖蛋白1(αZGP1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　99%　瑟氏泰勒虫（宁县株）　25g

斯钙素1(STC1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　99%　鲁氏接合酵母　5g

丝蛋白结合LIM蛋白1(FBLIM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　>98.0%(GC)　食环氧化物交替红色杆菌　100g

L-型电压依赖性钙离子通道α1D亚基(CACNα1D)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　>98.0%(GC)　孟氏假单胞菌　25g

白介素1β(IL1β)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　>98.0%(GC)　Luteolibacter　5g

神经纤维素2(NF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　97%　小叶相思根瘤菌　100g

母系蛋白2(MATN2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　97%　类诺卡氏菌属　25g

皮质酮(CORT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　97%　梭菌属　5g

抗利尿激素(ADH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　≥98%　苏云金芽胞杆菌亚毒亚种　5mg

酪胺酸酶(TYR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　97%　丛毛红曲　250mg

组织蛋白酶G(CTSG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　98%　东方伊萨酵母　1g
大鼠肺泡巨噬细胞规格人支持Human Testis : Normal Sertoli Cell Derivatives人支持细胞提取物是从人支持细胞提取的，人支持细胞从正常人组织制备。正常人组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

人叶酸(FA)ELISA试剂盒4E-BP2 Antibody20 ul

人黏着斑激酶(FAK)ELISA试剂盒4E-BP2 Antibody100 ul

人FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)100 ul

人FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)ELISA试剂盒ZO-2 Antibody20 ul

人鞭毛蛋白(flagellin)ELISA试剂盒ZO-2 Antibody100 ul

人丝狀血球凝集素(FHA)ELISA试剂盒Vav2 (C64H2) Rabbit mAb100 ul

人纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒 IRF-9 (D8G7H) Rabbit mAb100 ul

人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒β-Catenin (L54E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)100 ul