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elisa試劑盒
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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)夾心法檢測(cè)過程

時(shí)間:2024/5/20閱讀:159
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   實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑和樣本均應(yīng)平衡至室溫;樣本復(fù)融后需再次離心,取上清檢測(cè);試劑或樣本配制時(shí),需充分混勻并盡量避免起泡;標(biāo)曲和樣本建議做復(fù)孔檢測(cè)。

1. 加樣:將標(biāo)準(zhǔn)品工作液依次加入到前兩列孔中,每個(gè)濃度的工作液并列加兩孔,每孔100 μL。待測(cè)樣品加入到其他孔,每孔100 μL(若樣本濃度高于檢測(cè)范圍,需用標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液稀釋后取樣)。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育90分鐘。提示:加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,避免產(chǎn)生氣泡。加樣時(shí)間宜控制在10分鐘內(nèi)。

2. 生物su化抗體/抗原:棄去液體,甩干,不用洗滌。每個(gè)孔中立即加入生物su化抗體/抗原工作液100 μL,混勻,酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃孵育1小時(shí)。

3. 洗滌:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加洗滌液350 μL,浸泡1-2分鐘,吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。重復(fù)此洗板步驟3次。提示:此處與其他洗板步驟都可用洗板機(jī)。每一步洗滌充分是實(shí)驗(yàn)的根本。

4. HRP酶結(jié)合物:每孔加酶結(jié)合物工作液100 μL,混勻,加上覆膜,37℃孵育30分鐘。

5. 洗滌:棄去孔內(nèi)液體,洗板5次,方法同步驟3。

6. 底物:每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,混勻,加上覆膜,37℃避光孵育15分鐘左右。提示:根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng)孵育時(shí)間,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止。

7. 終止:每孔加終止液50 μL,終止反應(yīng)。提示:終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 讀值:立即用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀預(yù)熱,設(shè)置好檢測(cè)程序。

9. 實(shí)驗(yàn)完畢后,將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至保質(zhì)期。


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