ELISA的檢測方法有直接發(fā)、間接法、競爭法基雙抗夾心法，其中直接法和競爭法應用較少，應有最多的是雙抗夾心法，其在敏感性基因特異性上有明顯的優(yōu)勢。

1、直接法

將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標抗體直檢測抗原。

相較于其他類型的ELISA實驗，直接ELISA實驗步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應，檢測結(jié)果不容易出錯。

但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會與ELISA版結(jié)合，實驗背景會比較高，而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實驗不太靈活。另外由于沒有使用二抗，信號沒有被放大，降低了測定的靈敏度。

2、間接法

將抗原固定于ELISA班上，隨后分兩步進行檢測：首先加入檢測抗體于抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。

于直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標記抗體，更經(jīng)濟，間接ELISA還提供了更大的靈活性。

缺點：存在交叉反應的可能性（酶標二抗直接與抗原結(jié)合），可能會增加背景，同時與直接ELISA相比，間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟，實驗周期延長。

3、夾心法

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其中一個抗體將抗原固定于載體上，即捕捉抗體，另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量，或不標記，再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量，這兩種抗體必須小心選取，才可以避免交互反應貨競爭相同額抗原結(jié)合部位。

4、競爭法

預先將抗原包被再固相載體上，并加入酶標記的特異性抗體，實驗時，加入待檢抗原（或抗體）。如果待檢物是抗原，則待檢抗原于預先包被再固相載體上的抗原競爭結(jié)合酶標抗體；如果待檢測物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標抗體競爭結(jié)合包被再固相載體上的抗原，通過洗滌洗掉被競爭結(jié)合的酶標抗體，最后加底物顯色。

需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。

競爭ELISA相對以上的三種方法更復雜一些，但以上三種ELISA類型都適用于競爭ELISA的形式，其主要有點在于可檢測不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專一性較差的問題。