质粒抽提提取方法

质粒抽提（Plasmid Extraction）方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

一、使用质粒提取试剂盒提取质粒时请参考具体试剂盒的操作说明。

二、碱裂解手提法:此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:

1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。

2、37℃振荡培养过夜。

3、取1.5ml菌体于Ep管(离心管)，以4000rpm离心3min，弃上清液。

4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.

6、加入0.15m1预冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.

7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等体积的异丙醇，混匀后静置10min.

9、以10，000rpm离心20min，弃上清。

10、用70%乙醇0.5ml洗涤一次，抽干所有液体。

11、待沉淀干燥后，溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水)