二抗的設(shè)計(jì)原理: 根據(jù)同一種來源的同種亞型抗體的Fc段是保守的，根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)出二抗，二抗與一抗的來源Fc段亞型相關(guān)。

選擇正確的二抗方式如下：

1. 針對(duì)一抗的宿主來源選擇：二抗指向一抗的物種。

2. 針對(duì)一抗的類別亞型的選擇： 

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。

3. 二抗的種屬來源：

除雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)以外，一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。

4. 二抗的耦聯(lián)標(biāo)記：

針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)方法選擇不同的標(biāo)記，一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(tuán)(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物su、金顆粒。一般做WB、 ELISA、 IHC等實(shí)驗(yàn)都是推薦HRP標(biāo)記的二抗，做IF FC等都是FITC標(biāo)記的抗體。

5. 預(yù)吸附二抗的選擇：

對(duì)于于富含免疫球蛋白的組織和細(xì)胞，通常推薦使用預(yù)吸附血清的二抗于蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用。預(yù)吸附的二抗與內(nèi)源免疫球蛋白發(fā)生相互作用的可能性較低，因此可降低非特異性背景

6. 特殊要求：

 F(ab’)2片段形式的二抗可避免與Protein A /G或與Fc受體的結(jié)合，其分子本身比較小，更容易滲透入細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)內(nèi)而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是只含有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，可用來封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白；一般無要求的都是指抗IgG H&L，它是zui常用也是性價(jià)bi 最高的二抗形式，這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng)，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亞家族反應(yīng)，因?yàn)樗械拿庖咔虻鞍锥加邢嗤妮p鏈.