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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR相關(guān)試劑>>恒溫?cái)U(kuò)增系列>> Bst 4.0 Basic Bead
貨號(hào) | A-PJ1009 | 分類 | 恒溫?cái)U(kuò)增系列 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 100Tx25μl | 品牌 | 撫生 |
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產(chǎn)品介紹:
Bst 4.0 Basic Bead
該制品為全體系凍干微球制品,內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用的反應(yīng)緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,其不包含任何染料,使用時(shí)只需要加入引物、模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉(zhuǎn)錄),還具有依賴于DNA 的聚合酶活性,因此無(wú)論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增。該制品是進(jìn)行 LAMP 及RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。
本制品不包含任何顯色染料,可自行搭配相關(guān)染料或檢測(cè)手段進(jìn)行 LAMP 反應(yīng),包括搭配 OG 染料管進(jìn)行橙綠變色、搭配標(biāo)記 Oligo 進(jìn)行試紙條檢測(cè)、搭配熒光染料進(jìn)行熒光檢測(cè)、搭配 Molecular Beacon 探針進(jìn)行熒光檢測(cè)等方法。
儲(chǔ)存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個(gè)月。
使用方法:(進(jìn)行 LAMP 橙綠變色擴(kuò)增):
1. 關(guān)于 OG 橙綠變色管說(shuō)明:橙綠變色染料(OG Dye)以烘干的形式預(yù)加在8聯(lián)管蓋上。LAMP反應(yīng)完畢后,將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見(jiàn)變色反應(yīng)(陽(yáng)性),而未擴(kuò)增的 EP 管為深橙色(陰性)。本試劑管常溫長(zhǎng)期保存。
2. 配制變色 LAMP 反應(yīng)體系
在 OG 染料管(0.2ml EP)反應(yīng)管中加入下述試劑
Bst4.0 Basic Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
注意:全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙
3. 反應(yīng)體系配好后,置于 65°C 進(jìn)行反應(yīng) 15~30min。(擴(kuò)增良好的引物組合,通常 20min 即可變色,一般不超過(guò)30min)。
4. 觀察結(jié)果:反應(yīng)結(jié)束后,從加熱裝置中將反應(yīng)管取出,室溫 2min,使整個(gè)反應(yīng)管冷卻下來(lái)。再次用力將反應(yīng)管
注意:
(1)觀察結(jié)果時(shí),盡可能不要與配制反應(yīng)空間共用,以防止污染操作臺(tái)。
(2)盡管 選取的為高密封
注意事項(xiàng):
(1)關(guān)于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后,可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部,以減少氣溶膠的污
(2)在使用其它熒光染料時(shí),使用濃度可自行優(yōu)化,通染料可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。
(3)本試劑不支持,濁度、pH 變色、HNB 變色反應(yīng),請(qǐng)勿嘗試。
(4)關(guān)于 LAMP 成品試劑的建議, Bst 4.0 Basic Bead凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩(wěn)定狀態(tài),可長(zhǎng)期保存。將擴(kuò)增引物加入到 OG 橙綠變色管底部,于 70°C 烘干,再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測(cè)試劑。
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