假陽性是指出現(xiàn)的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。
產(chǎn)生的原因有:
①引物設(shè)計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產(chǎn)物為非目的序列;
②靶序列太短或引物太短;
③靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染。
解決方法有:操作輕柔,防止靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外造成污染;除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材高壓消毒;離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時,可在加標本前,將反應管和試劑用紫外光照射,以破壞存在的核酸。
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