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配置常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑詳述

時間:2023/8/7閱讀:356
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幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶ye等)。

1、無鈣、鎂、離子溶液(1000ml)

氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫na、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氫na(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL

2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸鹽緩沖液

甲液:0.2mol/L磷酸氫二na溶液、磷酸氫二na(無水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL

乙液:0.2mol/L磷酸二氫na溶液、磷酸二氫na(無水)2.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL

甲、乙液于4℃保存,使用時按表3-2所示比例,配制成所需pH濃度,高壓滅菌后室溫保存。

3、Hanks液(HBSSHank's Balanced salt solution)

 ⑴ 母液甲(20x)配法

①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中,前一物質(zhì)溶后再加后一種。

②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中,溶時不斷攪拌(此液應(yīng)單配,單溶)。

待上述兩溶液中的"溶質(zhì)"全溶后,將它們混合,再用雙蒸水補至1000mL,向其中加2mL作為防腐劑,置4℃保存。

 ⑵ 母液乙(20×)配法

①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。

②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL,直到全部溶解,移入100mL容量瓶中,加水至100mL,過濾,pH為7.4,4℃保存。

待上述各"溶質(zhì)"*溶解后,用雙蒸水補至1000mL,其中加2mL作防腐劑,置40℃保存。

(3) 使用液(1×)配法

取母液甲和母液乙各一份,加雙蒸水18份,分裝后,塞好瓶塞,掛上標(biāo)志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞),置室溫后4℃保存,可使用幾個月。臨用前,用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。

4、Eagle's液(EBSSEagle's Balanced salt solution)

是一種在二氧化碳(CO2)環(huán)境中短期維持細(xì)胞活性的平衡鹽溶ye,可用于細(xì)胞解離前的清洗、細(xì)胞或組織的運輸、細(xì)胞計數(shù)時稀釋、溶液的配置等。

5、HEPES液

生物緩沖液,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,在PH7.2~7.6范圍內(nèi),比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強。

6、NaHCO3緩沖液

常規(guī)緩沖體系的一部分,但是不穩(wěn)定,易受空氣中CO2的含量而改變PH值,影響緩沖效果。


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