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閱讀:77發(fā)布時(shí)間:2017-8-10
抗體因?yàn)樾再|(zhì)和所運(yùn)用的貯存條件不同,其存儲(chǔ)的“保質(zhì)期”可能從幾周到幾年不等。雖然每個(gè)抗體存儲(chǔ)的條件是共同的,但仍是能夠總結(jié)出一些關(guān)于抗體存儲(chǔ)建議和一般原則。
一:低溫對(duì)抗體的保存至關(guān)重要
一般來(lái)說(shuō),抗體存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下一般會(huì)因?yàn)槲⑸锏某砷L(zhǎng)導(dǎo)致抗體退化和/或失活??贵w貯存液放在4℃環(huán)境中1天或許幾周內(nèi)其活性不會(huì)遭到明顯影響。別的,抗體中能夠參加終濃度為50%的甘油或乙二醇貯存于-20℃。一般我們?yōu)榱吮苊庵貜?fù)凍融,能夠分裝抗體。還能夠參加抗微生物藥物(如*或硫柳汞)以避免微生物的成長(zhǎng)。帶有符號(hào)的抗體一般能夠在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷凍保護(hù)劑的污染物可能會(huì)影響酶的活性。
一些研究人員發(fā)現(xiàn)多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性丟失不大。但是,一旦抗體被純化后,貯存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒(méi)有凍融,其活性的丟失也能夠觀察到,雖然其進(jìn)程依然十分緩慢。單克隆抗體能夠用兩種方法保存:*,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比較好的方法,將其保存在飽滿硫酸銨于4℃或-20℃(4℃更好)保存。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體是存放在-20℃。
二:向抗體貯存液中參加抗氧化劑是避免抗體因氧化失效的關(guān)鍵步驟
氧化反響是某些酶,尤其是巰基酶的共同問(wèn)題。為了避免氧化反響對(duì)抗體的損壞,我們能夠向抗體中參加一些還原劑(如二硫蘇糖醇(DTT)或 巰基乙醇(2-ME))。試驗(yàn)證明:越高的pH環(huán)境和溫度,有酶活性的抗體的保存時(shí)刻越短。此外,參加0.1mM的銅離子,其氧化率添加;而參加金屬螯合劑EDTA可添加有效期。
三:蛋白質(zhì)安穩(wěn)劑和抗生素對(duì)抗體的安穩(wěn)貯存發(fā)揮著重要作用
蛋白質(zhì)安穩(wěn)劑能夠延伸大多數(shù)蛋白質(zhì)在4℃或-20℃的保質(zhì)期。而25-50%的甘油或乙二醇等防凍劑有助于安穩(wěn)抗體,避免在-20℃環(huán)境中形成冰晶,避免其損壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。蛋白酶按捺劑的參加能夠避免抗體發(fā)作水解反響導(dǎo)致其失活。而抗微生物藥物,如終究濃度在0.02-0.05%(W / V)的*(NaN3的)或終濃度為0.01%(W / V)的硫柳汞能夠按捺微生物的成長(zhǎng)。
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