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閱讀:306發(fā)布時間:2017-1-6
細(xì)胞因子中不含載體蛋白或別的添加劑,而且通常以zui少數(shù)的鹽來進(jìn)行凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會堆積于管內(nèi),構(gòu)成很薄或不行見的蛋白層。
咱們建議在收到商品后,必須在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白集合于管底(此刻能否見到白色沉積均屬正常景象)。
離心:高速離心20-30秒,或低速離心5分鐘。
溶解時不行振動,防止因化學(xué)鍵的開裂形成蛋白失活,可參加恰當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細(xì)胞因子*溶解后運用。
細(xì)胞因子溶解時溶劑的選擇:
請求用去離子水溶解的商品,必須不行用鹽溶液,防止過高的鹽濃度形成蛋白不行逆的分出;
請求用鹽溶液溶解的商品,請依照細(xì)胞因子說明書上的濃度,相同也是為了防止過高的鹽濃度。
溶解:細(xì)胞因子用去離子水或其它緩沖液溶解至說明書請求的濃度 (通常為 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的商品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。
工作液在4℃可保留1周,如需長時間保留,則需分裝凍存于-20℃ (留意:不行凍存于-80℃)。
分裝時每管中工作液的體積是一次試驗的用量,以完成每次試驗用完一只工作液,防止反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白活性的下降。
細(xì)胞因子分裝和儲存:細(xì)胞因子蛋白溶解后可根據(jù)自己的試驗需求進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其間富含5-10%的FCS(小?;蛱ヅQ澹┗?.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩(wěn)定蛋白。
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