ELISA試劑盒血清中有些細(xì)胞因子的檢出率很低，血清中又富含很多大分子雜蛋白，在血清濃度較高時(shí)簡(jiǎn)單隱秘抗原的表位，因此在測(cè)血清原液經(jīng)常出現(xiàn)負(fù)值。
這便是在我們的說(shuō)明書(shū)中建議查看血清時(shí)做1:2稀釋的因素。
除TGF-B1、sICAM-1、MMP-9、TIMP-1等要做高倍稀釋外，其它一些細(xì)胞因子都要做1:2稀釋?zhuān)ㄟ@在我們的說(shuō)明書(shū)中有提示）。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)假如按上訴方法處理后查看仍有負(fù)值，則處理數(shù)據(jù)時(shí)能夠采用2個(gè)方法：
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)只取標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的下面4~5個(gè)點(diǎn)，即125，62.5，31.25，15.625，7.8，0，或62.5，31.25，15.625，7.8、3.9、0。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原則是把樣本的OD值全包含，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)又能至少有4個(gè)點(diǎn)。
做法是：先在樣本孔中加50ul試劑稀釋液（試劑盒中已備），再加50ul樣本。
求出樣本含量后需要乘上稀釋倍數(shù)2。
這么改變后，一般樣本都能得到數(shù)據(jù)，低的樣本出來(lái)了，高的樣本含量也會(huì)高一些。
由于核算時(shí)是相對(duì)含量的比照，所以不會(huì)影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)核算效果。
也便是把標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的下端（即樣本含量會(huì)合的這一段）擴(kuò)展，求出的數(shù)據(jù)更可靠。
人為的把“0”pg/ml點(diǎn)OD值降低。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原則是把“0”OD值降到比zui低的樣本OD略低一點(diǎn)，盡可能使樣本的含量滿(mǎn)是正值，一同保證改變“0”OD值后的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)（r）＞0.98。
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