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上海晶抗生物工程有限公司
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閱讀:218發(fā)布時(shí)間:2017-5-18
ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法,是一種常用的固相酶免疫測(cè)定辦法。 由于ELISA辦法簡(jiǎn)略,便利,活絡(luò),特異性強(qiáng)且不需求特別設(shè)備(只需求酶標(biāo)儀就可以),所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。
可是影響ELISA測(cè)定的要素有許多,而其操作中需求有必定的技能要求,如操作辦法,環(huán)境,樣本等,有時(shí)??梢姷揭恍┻^錯(cuò)成果(即假陽性或假陰性)等,樣本的重要性關(guān)系到全部試驗(yàn)的成果,上海晶抗生物為我們解讀ELISA檢查的影響要素之一-樣本的影響
1、ELISA試劑盒樣本的保留:在冰箱中保留過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)致使本底過深、會(huì)形成假陽性;為防止上述問題,在測(cè)定血清標(biāo)本時(shí)新鮮收集;假如不能立即測(cè)定,依據(jù)相應(yīng)的時(shí)刻保留相應(yīng)的溫度,5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)有些濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不行強(qiáng)烈振蕩。
2、ELISA試劑盒樣本的凝結(jié):樣本凝結(jié)不全。在試驗(yàn)中,有的時(shí)分心急為了爭(zhēng)取時(shí)刻快速檢查,在血液還未開端凝結(jié)的時(shí)分就強(qiáng)行離心別離血清,致使血清中仍殘留有些纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性成果;因而血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清。
3、樣本的時(shí)刻:由于塑料試管能吸附抗原物質(zhì),所以樣本長(zhǎng)時(shí)刻放在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量降低形成假陰性。特好的辦法是運(yùn)用真空*;并運(yùn)用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)添加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
4、樣本受細(xì)菌污染:因菌體中可能會(huì)富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本相同,可能會(huì)發(fā)生非特異性顯色而攪擾測(cè)定成果。
5、ELISA試劑盒樣本溶血:溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清選用ELISA法檢查易發(fā)生假陽性??赡苁侨苎逯懈缓^氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中通常難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),然后催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,發(fā)生假陽性[2]。所以嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。
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