ELISA定量檢查試劑盒操作與顯色
ELISA定量檢查試劑盒操作過程
試驗(yàn)開端前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解)；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量防止起泡。試驗(yàn)前應(yīng)猜測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品契合試劑盒的檢查規(guī)模，核算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：別離設(shè)空白孔、規(guī)范孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔別離加規(guī)范品或待測(cè)樣品100μl，留意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反響120分鐘。為確保試驗(yàn)成果有效性，每次試驗(yàn)請(qǐng)運(yùn)用新的規(guī)范品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不必洗刷。每孔加檢查溶液A工作液 100μl(在運(yùn)用前一小時(shí)內(nèi)制造)，酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反響60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大概400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢查溶液B工作液(同檢查A工作液) 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反響60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此刻肉眼可見規(guī)范品的前3-4孔有顯著的梯度蘭色，后3-4孔梯度不顯著，即可停止)。
7. 依序每孔加停止溶液50μl，停止反響，此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。停止液的參加次序應(yīng)盡量與底物液的參加次序一樣。為了確保試驗(yàn)成果的性，底物反響時(shí)刻到后應(yīng)盡快參加停止液。
ELISA定量檢查試劑盒的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。恰當(dāng)提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)定力求。
顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。
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