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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中波長(zhǎng)與比色的關(guān)系

閱讀:297發(fā)布時(shí)間:2016-12-26

ELISA試劑盒一般的表明辦法是將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角,如OPD 的吸收波長(zhǎng)為492nm,表明辦法為"A492nm"或"OD492nm" 。
因而,雙波長(zhǎng)比色測(cè)定具有能排除由微滴板自身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、塵埃等對(duì)特異顯色測(cè)定吸光度的影響的利益。
比色成果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按劃定用吸光度(absorbence,A),兩者意義一樣。
所謂的單波長(zhǎng)比色等于一般的以對(duì)顯色具有吸收的波長(zhǎng)如450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定;
以軟板為載體的實(shí)驗(yàn),需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色。
ELISA試劑盒比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),測(cè)讀底物孔(未經(jīng)任何反響僅加底物液的孔)和空缺孔(以鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔),以記實(shí)本次實(shí)驗(yàn)的狀況。
在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這么,此板就可*平妥坐入座架中。
而雙波長(zhǎng)雙色則酶標(biāo)儀在靈敏波長(zhǎng)如450nm和非靈敏波長(zhǎng)630nm下各測(cè)定一次,靈敏波上下的吸光度測(cè)定值為樣本測(cè)定酶反響特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、塵埃等臟物所造成的的吸光度之和;
非靈敏波長(zhǎng)下測(cè)定即改動(dòng)波長(zhǎng)至必定值,使得樣本測(cè)定酶反響特異顯色的吸光度值為零,此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。
ELISA試劑盒以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm,濾光片需依據(jù)要求隨時(shí)替換。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中單個(gè)空缺孔的非特異吸收上有必定程度的不確定性,也就是說(shuō)每次測(cè)定或同次測(cè)定空缺孔方位的不一樣均有也許得到不一樣吸光度測(cè)定值,所以在ELISA測(cè)定比色時(shí),是使用雙波長(zhǎng)比色。


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