我司全體ELISA試劑盒產(chǎn)品熾熱*，*，質(zhì)量保證，產(chǎn)品買的多扣頭就多，另有禮品贈送。我司主營現(xiàn)貨產(chǎn)品有ELISA試劑盒、規(guī)范品、抗體、染色液、血清、細胞株、培育基等，訂貨！本公司產(chǎn)品僅用于科研運用，不供臨床實驗。
一、勻漿介質(zhì)（量）
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可依據(jù)樣本及測定目標的狀況自行設(shè)定濃度,意圖是堅持樣本的等滲環(huán)境。
二、細胞樣本的前處理:
1、細胞沉積的搜集：
①懸浮細胞:關(guān)于懸浮培育的細胞，直接經(jīng)過離心搜集細胞沉積，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。
②貼壁細胞:關(guān)于貼壁培育的細胞，用*將細胞消化下來，或用細胞刮將細胞刮下來，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。
我們一般主張客戶，細胞密度不要小于一百萬個/ml。
2、ELISA試劑盒細胞沉積的洗刷：
在細胞沉積中參加0.5-1ml的PBS（等滲），悄悄倒置混勻，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細胞沉積。重復(fù)上述操作重復(fù)洗刷1～2次。
3、勻漿的辦法：手藝勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,重復(fù)凍融。
①手藝勻漿：在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。
②超聲破碎:
在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進行如下操作:
a、用超聲粉碎機進行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，空隙10秒重復(fù)3～5次。
b、用超聲細胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。
③裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的效果是不同的，或者說效果力量強弱不同。
1、SDS歸于離子型去垢劑，zui厲害，根本能夠把細胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。
2、NP-40是很溫文的去垢劑，1%濃度的根本能夠損壞掉胞膜，而對核膜損壞的效果弱，結(jié)合特定的buffer能夠獲得胞漿蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，傾向于NP40，也是常用的細胞裂解液成分之一，在維護蛋白活性方面有必定效果（SDS根本會使蛋白變性失活）。
去垢劑特點僅僅一方面，buffer、配比、濃度、提取辦法和資料處理也都是關(guān)鍵因素
因為許多裂解液都是蛋白變性劑,對酶生機的測定有必定的影響,一般不引薦用裂解液進行裂解。
④重復(fù)凍融:
ELISA試劑盒在細胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測目標的不同而有所改動，一般參加0.5ml，細胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，重復(fù)3次左右）。因為重復(fù)凍融對酶生機影響較大,一般不引薦運用。