ELISA試劑盒當(dāng)抗原材料中的攪擾物質(zhì)不易除掉，或不易得到滿足的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)賽與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因而陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會(huì)有攪擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體，然后參加抗原，構(gòu)成固相抗原。洗刷除掉抗原中的雜質(zhì)，然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競(jìng)賽結(jié)合反響。競(jìng)賽法測(cè)抗體有多種形式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)賽結(jié)合，抗HBc ELISA一般選用此法。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一同參加到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)賽結(jié)合，洗刷后再參加酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反響?？笻Be的檢測(cè)一般選用此法。
實(shí)驗(yàn)過程 
1.  以稀釋液將待檢標(biāo)本做恰當(dāng)稀釋（預(yù)試中斷定）參加包被有已知抗原的酶標(biāo)板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。
2.  棄反響液，以沖洗液接連洗板5次并于吸水紙上拍干。
3.  參加酶標(biāo)抗體（濃度在預(yù)試中斷定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4.  重復(fù)第2步。
5.  加底物（濃度在預(yù)試中斷定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時(shí)調(diào)查，顯色滿意后加停止液50ul/孔。
6.  于酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，OPD用492nm測(cè)定，TMB用450nm測(cè)定。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng) 
1.  每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)做陰性對(duì)照、陽性對(duì)照及空白對(duì)照（以PBS替代標(biāo)本），后者為本底值，在剖析實(shí)驗(yàn)成果時(shí)應(yīng)扣除本底值，陽性對(duì)照<陰性對(duì)照<空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)成立。
2.  一般以為小分子抗原宜用本法檢測(cè)，而大分子抗原則宜選用夾心法檢測(cè)，但詳細(xì)宜選用哪種辦法
應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)決定，本發(fā)與夾心法比較在操作上削減一步。包被抗體與酶標(biāo)抗體如果別離選用單克隆抗體和多克隆抗體時(shí)，宜用單克隆抗體作為包被抗體，以多克隆抗體作為酶標(biāo)抗體。3.  血清標(biāo)本中抗原濃度一般較低，故一般用原倍標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，必要時(shí)可進(jìn)行稀釋測(cè)定，但應(yīng)從頭探索酶標(biāo)抗原的濃度，以保證辦法的靈敏性。
4.  以酶符號(hào)抗原的辦法同酶符號(hào)抗體。
5.  其它注意事項(xiàng)同酶聯(lián)免疫間接法。
ELISA試劑盒競(jìng)賽法測(cè)抗原的原理與過程中，如您有任何疑問可聯(lián)絡(luò)我們咨詢。