在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在 1.0-1.5 之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。競(jìng)爭(zhēng)法 ELISA 不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P 和N 的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。
a. 陽(yáng)性判定值法
與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照 A 值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc 的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照中抗HBc 含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3 個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A 值后，先計(jì)算陰性對(duì)照A 值的平均值(NC X )和陽(yáng)性對(duì)照A 值的平均數(shù)(PCX)，兩個(gè)平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3 個(gè)陰性對(duì)照 A 值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2 個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算×NCX；如有2 個(gè)陰性對(duì)照A 超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性
判定值按下式計(jì)算：
陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
標(biāo)本 A 值≤陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陽(yáng)性，A＞陽(yáng)性判定值的反應(yīng)為陰性。
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合中標(biāo)本對(duì)陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，按下式計(jì)算：
抑制率(%)= (陰性對(duì)照A 值-標(biāo)本A 值)×/陰性對(duì)照A 值一般規(guī)定抑制率≥50%為陽(yáng)性，＜50%為陰性。