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內(nèi)標(biāo)法 internal standard method 是色譜分析中一種比較準(zhǔn)確的定量方法,尤其在沒有標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照時(shí),此方法更顯其*性。內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物(參見內(nèi)標(biāo)物條)加到一定量的被分析樣品混合物中,然后對(duì)含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析,分別測定內(nèi)標(biāo)物和待測組分的峰面積(或峰高)及相對(duì)校正因子,按下列公式和方法即可求出被測組分在樣品中的百分含量。
校正因子:
f= (As/ms)/(Ar/m)
其中As和Ar分別為內(nèi)標(biāo)物和對(duì)照品的峰面積或峰高,ms和mr分別為加入內(nèi)標(biāo)物和對(duì)照品的量。
再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物的待測組分溶液進(jìn)樣,記錄色譜圖,再根據(jù)含內(nèi)標(biāo)物的待測組分溶液色譜峰響應(yīng)值,計(jì)算含量(mi):
mi=f×Ai/(As/ms)
其中 Ai和As分別為供試品和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高,ms為加入內(nèi)標(biāo)物的量。必要時(shí),再根據(jù)稀釋倍數(shù)、取樣量和標(biāo)示量折算成為標(biāo)示量的百分含量,或根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量折算成百分含量。
當(dāng)配制校正因子測定用的對(duì)照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的待測組分溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí),則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱(量)取。
采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí),內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。理想地說,內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是一個(gè)能得到純樣的已知化合物,這樣它能以準(zhǔn)確、已知的量加到樣品中去,它應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征,是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當(dāng)然,在色譜分析條件下,內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是,在少數(shù)情況下,分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復(fù)雜過程中所得到的回收率,此時(shí),他可以使用一種在這種過程中很容易被*回收的化合物作內(nèi)標(biāo),來測定感興趣化合物的百分回收率,而不必遵循以上所說的選擇原則。g
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