人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽elisa試劑盒選擇

◎試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。

◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。

◎特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。

◎精密度：ELISA試劑一般指其批內CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍。

◎準確度：通過添加回收實驗進行評價。

◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結果判斷簡單明了，定量試驗結果計算也應簡單。

◎安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。

◎經(jīng)濟性：試劑在同等質量條件下通過大規(guī)模生產或技術進步降低成本，而市場價格比較合理。

◎試劑評價：需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。

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標本收集:

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃**后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。

2.血漿：抗凝劑*使用EDTA，標本采集后30分鐘內于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。

3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

4. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

5.標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內，避免反復凍融，1-6月內檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。
溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內ELISA商品試劑盒的反應溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時，elisa試劑盒則通常為37℃ 1～2小時才能有較*的結合，低于1小時，可能會影響測定下限。因此，關于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：
(1)要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。一般來說，加完樣本和/或反應試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內質控中，測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因為何？這可能就與南方冬天室內溫度較低有關，此時微孔板轉入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。因此，為保證37℃下足夠的溫育時間，臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內溫度才能達到37℃，從而適當延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。

(2)溫育溫度的選擇。在等elisa試劑盒的說明書中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37℃下1小時，另一種則為43℃下45分鐘。從免疫測定的抗原抗體反應的本質來看，在較低的溫度下反應較長的時間zui為*。如2～8℃下反應24小時。較高的反應溫度，由于分子運動的加憐惜，反應時間縮短，這一點對分子含量較多的強陽性樣本的測定沒有問題，但對分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的可能。因此，我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。