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所 在 地上海
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更新時間:2017-12-12 04:42:55瀏覽次數(shù):242次
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馬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/ELA)elisa試劑盒標(biāo)本收集:
1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃**后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。
2.血漿:抗凝劑*使用EDTA,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。
3. 其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測
4. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。
5.標(biāo)本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,1-6月內(nèi)檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。
6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。
溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。
溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘~1小時,elisa試劑盒則通常為37℃ 1~2小時才能有較*的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。因此,關(guān)于溫育,在實際測定操作中一定要注意以下幾點:
(1)要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。一般來說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時間可能還比較長,而在臨床實驗室中,很少有人注意這個問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時,這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠,弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題,就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間,在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中,測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時,總是測不出來,不知原因為何?這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠,以致弱陽性樣本測定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時間,臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,從而適當(dāng)延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是,用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。
(2)溫育溫度的選擇。在馬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/ELA)elisa試劑盒等elisa試劑盒的說明書中,指出溫育溫度可有兩種,例如,一種是37℃下1小時,另一種則為43℃下45分鐘。從免疫測定的抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)來看,在較低的溫度下反應(yīng)較長的時間zui為*。如2~8℃下反應(yīng)24小時。較高的反應(yīng)溫度,由于分子運動的加憐惜,反應(yīng)時間縮短,這一點對分子含量較多的強(qiáng)陽性樣本的測定沒有問題,但對分子含量少的弱陽性樣本則有漏檢的可能。因此,我們建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時間的條件。
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