漫漫人生路，誰(shuí)都難免會(huì)遭遇各種失落或厄運(yùn)。在凄風(fēng)苦雨慘霧愁云的檢測(cè)面前，一個(gè)強(qiáng)者，是不會(huì)向命運(yùn)垂頭的。風(fēng)再冷，不會(huì)永遠(yuǎn)不息；霧再濃，不會(huì)經(jīng)久不散。風(fēng)息霧散，仍是陽(yáng)光燦爛。接下來(lái)給大家講講細(xì)胞凍存與復(fù)蘇 。

    細(xì)胞凍存

    1.試驗(yàn)前預(yù)備：細(xì)胞室及工作臺(tái)紫外線照耀15min；培育液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒溫水浴箱37℃預(yù)熱備用；搜集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，在凍存前一天換液

    2.用吸管吸出培育瓶中的細(xì)胞培育液，PBS清洗2遍吸出沖洗液，參加適量胰蛋白酶消化。

    3.當(dāng)令去掉胰蛋白酶，參加少數(shù)新培育液。吸管汲取培育液吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻渙散的細(xì)胞懸液。

    4.用吸管將培育液參加凍存管中，離心(1000r/min，10分鐘)。

    5.去上清液，參加與細(xì)胞懸液等量的凍存液，用吸管悄悄吹打使細(xì)胞均勻

    6.冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(shí)(或隔夜)---液氮槽vaporphase長(zhǎng)期貯存。-20℃不可超越1h，以避免胞內(nèi)冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞很多損壞，亦可跳過(guò)此過(guò)程直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微下降一些。

    7.記載每一個(gè)冷凍管的位置以保證在今后應(yīng)用時(shí)可以找到每一個(gè)冷凍管。

    細(xì)胞復(fù)蘇

    1.室內(nèi)紫外消毒；培育基、PBS于37℃恒溫水浴預(yù)熱備用。

    2.自液氮罐中取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速凍結(jié)，離心。
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    3.去上清，參加培育基，吹打，然后移入培育瓶中，用培育基清洗凍存管，清洗液也移入培育瓶中。

    4.于培育瓶中參加適量培育基，放入CO2培育箱中培育

    5.記載復(fù)蘇日期；次日換液。

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